從小鼠腹股溝脂肪墊獲取ASCs
| 實驗方法原理 | 人和小鼠的脂肪組織均可用于分離ASC，可以獲得相當數目的ASCs。人脂肪組織通常來源于抽脂。小鼠脂肪組織則取自腹股溝處脂肪墊。 |
|---|---|
| 實驗材料 | 小鼠 4?6只 |
| 試劑、試劑盒 | Hank’s緩沖鹽溶液（HBSS) ASC培養基 膠原酶溶液 聚乙烯吡咯酮碘溶液 麻醉劑：三溴乙醇 37℃水浴 |
| 儀器、耗材 | Petris培養皿 9 cm 離心管 50 ml 組織培養瓶 25 cm2 剪刀（2把） 鑷子（2把） |
| 實驗步驟 | (a)37℃水浴中預熱HBSS和ASC培養基。 (b)麻醉動物后處死。 (c)轉移動物至層流凈化罩中。 (d)70%酒精消毒腹部。 (e)采用低位橫向切口打開腹腔。 (f)用鑷子取出性腺/附睪和腹股溝處的脂肪墊。 (g)將脂肪置于培養皿中，加入HBSS。 (h)待所有動物脂肪取出后，將脂肪轉移至新的培養皿中。 (i)加人含有5%聚乙烯吡咯烷碘酮的HBSS 2?3 min。 (j)漂洗組織并用HBSS洗滌脂肪。 (k)用無菌鑷子將脂肪轉移至50 ml離心管中。 (l)用無菌剪刀將脂肪切碎。 (m)加入與組織體積相同的膠原酶溶液并混勻。 (n)將離心管置于37℃水浴中60 min,其間不時混勻一下。 (o)離心，50?100 g，5 min。 (p)取出離心管，用力搖晃（將基質細胞與原代脂肪細胞完全分離），再次離心5 min。. (q)小心吸去上層油脂，油脂層中含有原代脂肪細胞，注意不要破壞位于下方的基質-血管細胞層。 (r)加人5?10 ml PBSA,重懸沉淀，再次離心5 min。 (s)洗滌三次，注意不要吸走基質-血管細胞層。 (t)最后一次洗滌后，加人8 ml ASC培養基重懸沉淀，轉移至T25培養瓶中，置于37℃,5% CO2溫箱中。 (u)待細胞貼壁生長2?4天后換液。 (v)換液時通過棄去培養基，從而去除未貼壁的細胞。 (w)以后每周更換培養基2次。 展開 |
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