蘇云金芽孢桿菌搖瓶培養基最優化研究

一、實驗目的：
    通過不同的試驗設計方法，對具較高殺蟲毒力的蘇云金芽孢桿菌WB7菌株進行搖瓶培養基最優化的研究
    二、材料與方法
    1 實驗室培養基篩選
    1.1 供試菌株
    蘇云金桿菌WB7菌株
    1.2 培養基
    初篩培養基配方組分如下：                       
    1.3 搖瓶培養與計數
    將活化菌種接種到新鮮的LB培養基中過夜，再按1%接種量轉接于各供試培養基，搖床振蕩培養至30%芽孢脫落。培養條件：250ml三角瓶每瓶裝量25ml培養基，滅菌前pH7.2，30℃下180 r/min。
    培養后菌液在無菌條件下10倍稀釋至10-7、10-8、10-9，并將此3個稀釋度在無菌條件下，吸取1ml于無菌平板中，每稀釋度重復3個平板。將滅菌后冷至不燙手的平板計數培養基倒入平板中（8-10ml），迅速旋轉平板，混勻后使培養基鋪滿整個平板，凝固后倒置平板于30℃培養18小時后取出。統計菌落數，選擇稀釋梯度中重復性最強者為試驗結果。
    1.4 溶解性葡萄糖培養基篩選
用BP、TP、PM、T-3四種初篩培養基進行搖瓶培養，稀釋平板計數后，篩選出對WB7生長較有利的培養基組合，并以此為基礎培養基，采用L27 ( 313 )正交表來安排試驗。正交試驗的因子與水平。
    1.5 碳、氮、磷的影響
    將葡萄糖作為碳源，蛋白胨、酵母膏作為氮源，KH2PO4為磷源，應用三因子二次正交旋轉組合設計安排試驗。各因子的水平編碼見表2，組合處理共20個，其中mc=8，mr=6，m0=6。