茶多酚是茶葉中的重要品質組成,含量多少與品種、栽培條件、加工方法有關,必須掌握其測定方法。酒石酸鐵比色法,方法簡便、快速,重現性好,容易掌握,已列為國家標準方法。
在一定的pH條件下,酒石酸鐵與茶多酚類物質形成藍紫色或紅紫色的絡合物,在波長540nm處比色,在適當的濃度范圍內,茶多酚的量與呈色的深淺成正比,可用分光光度法定量。本實驗學習用酒石酸比色法測定茶多酚類物質的方法。
一、試材及用具
1.試材 茶葉磨碎試樣
2.儀器 分光光度計 、實驗室常規玻璃儀器(三角瓶、漏斗、容量瓶、移液管、量筒等)
3.試劑
(1)酒石酸鐵溶液:稱取硫酸亞鐵(FeSO4·7H2O)1g與酒石酸鉀鈉(KNaC4H4O6·4H2O)5g,加水溶解稀釋至1L。該溶液可穩定10 d。
(2)pH7.5的磷酸緩沖液 先配制以下兩種溶液:
a.1/15mol/L的磷酸氫二鈉溶液 稱取11.876g的Na2HPO4·2H2O,加水溶解,稀釋至1L (若用無結晶水的需稱取9.47g,若用含12個結晶水的需稱取23.872g,其余操作相同)。
b.1/15mol/L磷酸二氫鉀溶液 稱取經110℃烘箱烘2h后的KH2PO4 9.078g,加水定容至1L。
取a液85mL和b液15mL混合后,即為pH7.5的緩沖液。
二、方法步驟
1.配制標準溶液
稱取茶多酚純品0.2500g,加水溶解定容至250mL,混勻,即為每毫升含1mg茶多酚的標準溶液。
2.繪制標準曲線
分別稱取標準溶液0.0mL、0.5mL、1.0mL、1.5mL、2.0mL于一組25mL棕色容量瓶中,各加水至5mL,再加酒石酸鐵溶液5mL,加緩沖液至刻度,混勻后用10mm比色皿,以試劑空白作參比,于波長540nm處測定吸光度,繪制出標準曲線。
3.茶湯制備
準確稱取磨碎試樣3g,加450mL沸水,在沸水浴中浸提45min,每隔10min搖瓶一次,過濾。洗滌殘渣,濾液合并于500mL容量瓶中,加水定容至刻度,搖勻。
4.測定
準確吸取茶湯1mL,注入25mL容量瓶中,加水4mL,酒石酸鐵溶液5mL,用緩沖液定容至刻度,混勻。用10mm比色皿,以試劑空白作參比,于波長540nm處測吸光度,從標準曲線查得溶液含茶多酚的量。
E—測試液測得的吸光度
3.913—當吸光度等于1.0時,每mL試液中茶多酚的量(mg)
M—試樣量(g)
m—試樣干物率%
L1—總試液量(mL)
L2—所取試液量(mL)
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