葉綠體色素的提取與分離和理化性質

（一）原理：

葉綠體中含有綠色素（包括葉綠素a和葉綠素b）和黃色素（包括胡蘿卜素和葉黃素）兩大類。它們與類囊體膜蛋白相結合成為色素蛋白復合體。它們的化學結構不同，所以它們的物化性質（如極性、吸收光譜）和在光合作用中的地位和作用也不一樣。

這兩類色素是酯類化合物，都不溶于水，而溶于有機溶劑，故可用乙醇、丙醇等有機溶劑提取。提取液可用色譜分析的原理加以分離。

因吸附劑對不同物質的吸附力不同，當用適當的溶劑推動時，混合物中各種成分在兩相（固定相和流動相）間具有不同的分配系數，所以移動速度不同，經過一定時間后，可將各種色素分開。

（二）材料、儀器設備和試劑

1. 材料：菠菜、小白菜葉片

2. 儀器設備：研缽，漏斗，三角瓶，剪刀，滴管，培養皿（直徑11cm），廣口瓶，圓形濾紙（直徑11cm）

3. 試劑：95%乙醇，石英砂，碳酸鈣粉，推動劑：按石油醚：丙酮：苯=10：2：1比例配制（v/v）

（三）試驗步驟

1. 葉綠體色素的提取

（1）取菠菜或其他植物新鮮葉片4-5片（2g左右），洗凈，擦干，去掉中脈剪碎，放入研。

（2）研缽中加入少量石英砂及碳酸鈣粉，加2-3ml 95%乙醇，研磨至糊狀，再加10-15ml 95%乙醇，離心35min，提取上清液過濾于三角瓶中，殘渣用10ml 95%乙醇沖洗，一同過濾于三角瓶中。

（3）如無新鮮葉片，也可用事先制好的葉干粉提取。取新鮮葉片（以菠菜葉最好），先用105℃殺青，再在80℃下烘干，研成粉末，密閉儲存。用時稱葉粉2g放入小燒杯中，加95%乙醇20-30ml 浸提，并隨時攪動。待乙醇呈深綠色時，濾出浸提液備用。

2. 葉綠體色素的分離

（1）取圓形定性濾紙一張（直徑11cm），將其剪成濾紙條（9cm×3cm），用滴管吸取乙醇葉綠體色素提取液，沿紙條的長度方向涂在紙條的一邊（距邊約1cm），使色素擴散的寬度限制在0.5cm以內，風干后，再重復操作數次。

（2）在層析缸中加入適量的推動劑，將濾紙條帶有色素的一端插入層析缸中，使濾紙條下端浸入推動劑中。迅速蓋好層析缸蓋。此時，推動劑借毛細管引力順濾紙條向上擴散，并把葉綠體色素向上推動，不久即可看到各種色素的條帶。

（3）當推動劑前沿接近濾紙邊緣時，取出濾紙，風干，即可看到分離的各種色素：葉綠素a為藍綠色，葉綠素b為黃綠色，葉黃素為鮮黃色，胡蘿卜素為橙黃色。用鉛筆標出各種色素的位置和名稱。