中性粒細胞堿性磷酸酶（NAP）染色及臨床意義

人體有多種細胞內含有一種叫做堿性磷酸酶的物質。血細胞內也含有這種物質，但多數不表現出活性，即處于“沉睡”狀態，只有中性粒細胞的成熟階段表現出堿性磷酸酶活性，我們稱之為中性粒細胞堿性磷酸酶(簡稱N—ALP)。

中性粒細胞堿性磷酸酶存在于成熟中性粒細胞的胞漿內，可以通過鈣—鈷方法使之著色來顯示。然后計算出反應的陽性率和積分，即可表示中性粒細胞堿性磷酸酶活性的高低。計算方法：顯微鏡下觀察100個成熟中性粒細胞，有陽性反應的細胞數即陽性率；再按下列標準評分，將每個細胞的積分相加，即得出積分：

　　0分——陰性反應。

　　1分——胞漿1／2以下的區域出現灰黑色到棕黑色沉淀。

　　2分——胞漿1／2～3／4的區域出現灰黑色至棕黑色沉淀。

　　3分——胞漿全部區域出現棕黑色或棕黑色沉淀(顆粒狀或片塊狀)，但密度較低，約占3／4的區域。

　　4分——胞漿全部皆被深黑色團塊狀沉淀所充滿，密度甚高，甚至遮蓋胞核。

　　正常人的中性粒細胞堿性磷酸酶活性為：陽性率平均為20～40％，積分平均為20～60分。當患有慢性粒細胞白血病時，其活性顯著減低，積分常為“0”，緩解后也無明顯增高；但慢粒急變后，N—ALP可增高。因此，中性粒細胞堿性磷酸酶活性的檢查，對診斷慢性粒細胞白血病是極為有用的。

　　但其它一些情況下，也可能出現中性粒細胞堿性磷酸酶活性減低，如急性粒細胞白血病時就可減低，但緩解后增高；病毒感染時可減低，但不如慢粒明顯；惡性組織細胞增生癥和淋巴瘤||時也會減低，但均不如慢粒那么顯著。

　　至于中性粒細胞堿性磷酸酶活性增高的情況則比較多見，如常見的細菌感染、類白血病反應、甲亢、貧血、特發性血小板減少性紫癜、多發性骨髓瘤、真性紅細胞增多癥、急性淋巴細胞白血病、陣發性睡眠性血紅蛋白尿等。

中性粒細胞堿性磷酸酶的顯示方法有偶氮偶聯法和鈣-鈷法兩種。前者的染色原理是血細胞內堿性磷酸酶在pH為9.4～9.6的條件下，將基質液中的α-磷酸萘酚鈉水解，產生α-萘酚與重氮鹽偶聯形成灰黑色沉淀，定位于細胞質內酶活性所在之處。鈣-鈷法染色是堿性磷酸酶在堿性條件下將基質液中的β-甘油磷酸鈉水解，產生磷酸鈉。磷酸鈉依次與硝酸鈣、硝酸鈷、硫化銨發生反應，形成不溶性棕黑色的硫化鈷，定位于酶活性之處。

　　堿性磷酸酶主要存在于成熟階段的中性粒細胞（分葉核及桿狀核），其他血細胞均呈陰性反應。陽性反應為胞質中出現灰色到棕黑色顆粒，反應強度分為5級，即"-"、"1+"、"2+"、"3+"、"4+"。反應結果以陽性反應細胞百分率和積分值來表示。血涂片染色后，在油浸鏡下，觀察100個成熟中性粒細胞，陽性反應細胞所占百分率即為陽性率；對所有陽性反應細胞逐個按反應強度分級，將各級所占的百分率乘以級數，然后相加，即為積分值。 成人NAP陽性率10％～40％；積分值40～80分。

　　由于各實驗室條件不同，參考值也有差異。 NAP活性可因年齡、性別、應激狀態、月經周期、妊娠及分娩等因素有一定的生理性變化。在病理情況下，NAP活性的變化常有助于某些疾病的診斷和鑒別診斷。

1. 感染性疾病：急性化膿菌感染時NAP活性明顯增高，病毒性感染時其活性在正常范圍或略低。

2. 慢性粒細胞白血病的NAP活性明顯減低，積分值常為0。類白血病反應的NAP活性極度增高，故可作為慢性粒細胞白血病||鑒別的一個重要指標。

3. 急性粒細胞白血病時NAP積分值差錯；急性淋巴細胞白血病的NAP積分值多增高；急性單核細胞白血病時一般正常或減低。

4. 再障時NAP活性增高；陣發性睡眠性血紅蛋白尿時活性減低，因此也可作兩者鑒別的參考。

5. 其他血液病：惡性淋巴瘤、慢性淋巴細胞白血病、骨髓增殖性疾病如真性紅細胞增多癥、原發性血小板增多癥、骨骨纖維化癥NAP活性中度增高，惡性組織細胞病時NAP活性降低。

6. 腺垂體或腎上腺皮質功能亢進時，應用腎上腺皮質激素、ACTH、雌激素等NAP積分值可增高。

堿性磷酸酶主要存在于成熟階段的中性粒細胞，其他細胞均呈陰性反應。陽性反應為在胞質中出現灰色到棕黑色顆粒，反應強度分為5級，即-、+、2+、3+、4+。反應結果以陽性反應細胞的百分率和積分值來表示。血涂片經染色反應后，在油鏡下，連續觀察100個成熟中性粒細胞，記錄其陽性反應細胞所占的百分率即為陽性率；并對所有陽性反應細胞逐個按其反應強度||作出+~4+的分級，將各級所占的百分率乘以級數，然后想加，即為積分值。參考值：陽性率10-40%，積分值40-80。

意義：

（1）急性化膿性感染時NAP活性明顯升高，病毒性感染時其活性在正常范圍或略低。因此，NAP可用于細菌和病毒感染的鑒別；

（2）慢性粒細胞白血病的NAP活性明顯降低，積分值常為0。類白血病反應的NAP活性極度增高，故可作為與慢性粒細胞白血病鑒別的重要指標。

（3）急性粒細胞白血病時NAP積分值減低；急性淋巴細胞白血病的NAP多增高；急性單核細胞白血病時一般正常或減低。故可作為急性白血病的鑒別方法之一。

（4）再生障礙性貧血時NAP活性增高；陣發性睡眠性血紅蛋白尿時活性減低，可作為兩者的鑒別。

（5）其他情況：如應用腎上腺皮質激素時NAP升高；惡性組織細胞病時NAP活性降低。