SARS早期檢測N蛋白陽性率最高，新冠呢？

　　今天看到2005年1月一篇文章，這篇文章的核心結論是：

　　針對SARS，對疑似患者血清標本進行N蛋白的檢測 , 比鑒定抗體更有意義，而且陽性率高。

　　如下圖，發病后1-5天，檢測N蛋白是陽性率最高的方法。

　　我想向各位專家請教的問題是：

　　1、這個結論可靠嗎？

　　2、對于COVID-19的病人，檢測新冠的N蛋白也會有這種效果么？

　　之所以想探究這個問題，原因是：

　　我們拿到了結合新冠N蛋白的核酸適配體（類似抗體），適配體可以用來開發N蛋白的檢測方法，如果這個結論在新冠狀病毒感染中也成立。我愿意免費開放我們的技術和適配體信息。

　　以下是原文的全文，連接見這里。

　　《四種試劑盒在SARS實驗室早期診斷中的作用分析》

　　高陽 周端華 吳新偉 陳小霜 狄飚 劉于飛 陳芳 杜琳 徐慧芳 顧菁 鄭伯健 徐建國

　　廣州市疾病預防控制中心 ,510080

　　摘 要：目的比較 4 種檢測嚴重急性呼吸綜合征冠狀病毒 (SARS CoV) 基因、抗原和抗體的試劑盒在SARS患者早期實驗室診斷的可能作用。方法

　　用 3 種酶聯免疫吸附試驗 (ELISA) 分別檢測SARS CoVIgG、SARS CoVIgM 和SARS CoVN蛋白 , 用熒光定量聚合酶鏈反應 (F PCR) 檢測SARS CoV核酸。

　　結果：根據 162份血清的檢測結果 , 發病 1-5 天 , N抗原的陽性率可達 90.2% (55 /61) ；發病后的第 15-18 天IgG和IgM陽性率為92.8% (13/14) ；根據 82 份咽拭子的檢測結果 , F PCR法在發病后1-5天的陽性率可達 5 6 .3% (14 / 2 4 ) , 6-9 天可達 71.4 % (10/14 ) 。

　　結論

　　除了檢測SARS CoV病毒基因的F PCR方法以外,對疑似患者血清標本進行N蛋白的檢測 , 具有早期預報意義。

　　關鍵詞：嚴重急性呼吸綜合征冠狀病毒； 陽性率；

　　收稿日期：2004-09-16

　　基金： 廣東省科技廳資助項目 (2 0 0 3FD0 2 0 4)；

《The effects of 4 laboratory test kits in early detecting of severe acute respiratory syndrome coronavirus》

　　Abstract：Objective To compare the 4 test kits on severe acute respiratory syndrome coronavirus (SARS-CoV) gene, antigen and antibody for early diagnose of SARS patients. Methods Three enzyme linked immunosorbent assay (ELISA) kits were used to detect SARS-CoV IgG, IgM and N protein and fluorescent polymerase chain reaction (F-PCR) kit was used to detect SARS-CoV RNA. Results In 162 serum samples, 90.2% (55/61) became N protein positive in 1-5 days and 92.8% (13/14) became positive IgM and IgG in 15-18 days after the onset of disease, respectively. On 82 gorgling samples, the positive rates of F-PCR were 56.3% (14/24) in 1-5 days and 71.4% (10/14) in 6-9 days after the onset. Conclusion Other than F-PCR, N protein had good effect in the early detection on dubious patients which could lead to effective prevention and control of the epidemic.

　　Keyword：Severe acute respiratory syndrome coronavirus； Positive rates；

　　Received： 2004-09-16

　　早發現、早診斷、早隔離是有效控制嚴重急性呼吸綜合征 (SARS) 爆發或流行的關鍵。但是, 一些早期病例的臨床癥狀往往不典型, 難以和常見的非典型肺炎鑒別。僅僅依靠臨床癥狀可延誤診斷, 錯失有效控制疫情的最佳時機。因此, 早期診斷往往依賴于實驗室檢測結果。目前, 可以發揮早期診斷作用的主要檢測方法有SARS冠狀病毒 (SARS-CoV) 核酸檢測 (RT-PCR) [1]、病毒特異性抗原檢測 (酶聯免疫吸附試驗, ELISA) 和抗體的檢測[2,3]。SARS-CoV特異性抗體檢測方法包括ELISA、間接免疫熒光法 (IFA) 和免疫印跡法 (WB) 。我們采用國內常用的幾種檢測病毒基因、抗原和抗體的方法, 對收集到的SARS患者的血清標本和漱口液標本進行比較檢測, 結果報道如下。

　　材料與方法

　　1.標本:

　　血清標本包括162份SARS患者血清和73份健康人血清標本。SARS患者血清來源于2003年2-4月廣州市住院患者, 其恢復期血清 (發病后3-5月) 抗體中和試驗均陽性 (中和試驗結果由香港大學提供) 。采血時間最早為發病后第1天, 最晚為發病后第59天。還包括廣州2003年12月至2004年1月確診為SARS的4例患者的血清標本。漱口液標本82份, 2003年2-4月采自廣州市各級醫院的SARS患者, 采樣時間最早為發病后第1天, 最晚為發病后第45天。

　　2.檢測方法:

　　采用第一軍醫大學珠江醫院開發的檢測N (nucleocapsid) 蛋白的試劑盒和北京華大吉比愛公司發展的檢測IgM和IgG抗體的試劑盒[4], 以及達安基因公司的檢測SARS-CoV基因熒光定量PCR試劑盒[5]。均按廠家提供的說明書嚴格操作。第一軍醫大學珠江醫院開發的ELISA方法, 是用基因工程表達的SARS-CoV N蛋白, 制備單克隆抗兔抗體, 包被微孔板, 以辣根過氧化物酶 (HRP) 標記的雙抗體夾心ELISA法。北京華大吉比愛的ELISA方法, 是用純化的SARS-CoV裂解液為抗原包被微孔板, 為間接ELISA法。達安基因公司的熒光定量PCR試劑盒是以SARS-CoV的pol基因1b區的一個保守區為靶基因, 擴增片段長度為85 bp, 設計特異性引物及熒光探針, 利用逆轉錄酶將RNA逆轉錄為cDNA, 再將cDNA進行PCR擴增, 利用全自動熒光PCR檢測儀在線檢測熒光信號, 用于漱口液等標本中的SARS-CoV核酸。

　　結果

　　1.特異性抗原、抗體檢測結果:

　　采用3種ELISA試劑盒檢測162例SARS患者血清標本的結果見表1。

表13種ELISA試劑盒檢測162例SARS患者 血清的結果

　　珠江醫院研制生產的檢測N抗原的試劑盒在發病后第1-5天檢測陽性率90.2%, 6-9天為76.0%, 10天以后檢測陽性率明顯下降 (χ2=7.41, P=0.01) 。北京華大吉比愛公司的檢測IgM和IgG抗體的ELISA試劑盒在發病后的第15-18天檢測率達92.8%。以后隨著發病后天數的增加, IgM抗體陽性率下降 (χ2=4.40, P=0.04) , IgG抗體陽性率不變 (χ2=0.01, P=0.93) 。73份健康者血清的N蛋白和IgM和IgG抗體的檢測結果均為陰性。

　　橫向比較不同檢測方法在發病后同一時間的檢測陽性情況發現, 感染后1-5天N抗原的陽性率最高 (χ2=175.17, P<0.01) , 6-9天仍為N抗原的陽性率最高 (χ2=26.39, P<0.01) , 發病后10-14天, IgM抗體和IgG抗體的陽性率高于N抗原 (χ2=6.51, P=0.04) , 發病后15-18天IgM和IgG抗體的陽性率仍然高于N抗原 (χ2=29.87, P<0.01) , 發病后19天以上者, IgG抗體的陽性率最高 (χ2=67.52, P<0.01) 。

　　2.核酸檢測結果:

　　采用熒光定量PCR法檢測82例SARS患者漱口液標本結果見表2。采用達安基因公司研制的熒光定量PCR試劑盒, 發病后第1-5天檢測陽性率56.3% (14/24) , 6-9天為71.4% (10/14) , 10-14天為63.6% (14/22) , 15天以后檢測陽性率明顯下降。

表2 熒光定量PCR試劑盒檢測70份SARS患者 漱口液的結果 下載原表

圖1為發病后的不同時間4種檢測方法的靈敏度曲線變化。4種試劑盒在SARS發病后不同時間的檢出陽性率

　　3. 2003年末以后新發4例SARS病例檢測結果:對2003年12月至2004年1月在廣州發現的4例SARS患者的血清和漱口液標本采用上述4種方法的檢測結果見表3。

表3 2003-2004年廣州4例SARS患者的檢測結果 下載原表

　　討論

　　本研究所選擇血清標本來源于162例SARS患者, 其臨床癥狀均符合衛生部頒發的《傳染性非典型肺炎臨床診斷標準 (試行) 》, 其相應的恢復期血清均經抗體中和試驗檢測為陽性, 為確診的SARS病例。所選擇的咽拭子標本來自于上述患者。

　　研究發現, 對于早期診斷來說, 在發病后1-5天采取患者血樣標本, 使用檢測N蛋白的試劑盒進行檢測, 陽性率可達90.2%。采取咽拭子、肛拭子等標本進行病毒基因的檢測, 使用熒光定量PCR陽性率則為56.3% (14/24) [6,7]。檢測IgM和IgG抗體的ELISA等試劑盒盡管在實踐中表現出一定價值, 但是由于SARS-CoV侵入機體、感染靶細胞、產生抗體需要一定的時間, 在發病1-6天基本上檢測不到針對N蛋白的特異性抗體[8,9,10]。因此從理論上講, 檢測N蛋白同時合并SARS-CoV基因檢測的方法, 可獲得更早的有診斷意義的數據。檢測N蛋白的試劑陽性率比較高的原因, 可能是因為N蛋白為SARS-CoV的主要蛋白, 合成的量大, 在病程早期以可溶性抗原的形式釋放到患者血液中[4]。

　　對2003年末廣州新發4例SARS患者血清和漱口液的檢測結果, 提供了進一步的資料。從檢測結果來看, N蛋白仍然表現出很好的早期診斷價值。但由于2003年末發病的患者臨床表現不典型, 癥狀輕, 預后好, 沒有發現傳播的證據, 而S基因的序列資料分析結果表明, 導致2003年末感染的SARS-CoV是動物源性的, 和2003年上半年人間流行的SARS-CoV有很大的區別, 因此兩者之間表現出的差異, 可能是因為病毒株的不同造成的[11,12]。

　　雖然我們選擇的患者均經過臨床診斷和血清中和試驗的確診, 但是血清標本和患者的相對應關系, 及與咽拭子標本之間的相對應關系不清。盡管2003年疫情的特殊情況給分析結果帶來了遺憾, 但仍然提供了非常有價值的參考數據[13]。我們的研究認為, 除了檢測SARS-CoV基因的PCR方法以外, 對疑似患者血清標本進行N蛋白的檢測, 具有早期預報意義, 雖然還不能夠明確診斷, 但是可提醒我們及時采取有效的預防和控制措施, 防止疫情的擴散, 并密切注視患者的抗體變化, 及時明確診斷。

　　附：關于新冠核酸適配體的相關問題回答

    免費贈送+免費授權使用—新冠病毒N蛋白的核酸適配體