丹酚酸B檢測方法

在萬眾矚目的淘寶雙十一購物節時，阿里巴巴董事局主席馬云發布了由他親自主演的一個短片電影《功守道》，知名影星李連杰、甄子丹、吳京等均有出場。《功守道》為文化類公益短片，旨在宣揚中國傳統文化，將太極拳等中華文化瑰寶推向整個世界。其間也穿插了其他的一些中國國粹——在其中的一幕，甄子丹在泡腳時，向水中加入了八味中藥：丹參，赤芍，澤蘭，王不留行、當歸、大黃、牛膝、川芎。這些中藥乃是知名藥品“丹參泡腳片”的主方，用于足浴，可起到改善血液循環、清心活血、活血通經、消腫祛瘀的功效。

丹參泡腳片的主藥是丹參。中藥丹參是唇形科植物丹參Salvia miltiorrhiza Bge.的干燥根和根莖。味苦，微寒。有活血祛瘀，通經止痛，清心除煩，涼血消癰的功效。丹參的主要有效成分包括丹參酮類和丹酚酸等。丹酚酸（salvianolic acid）系丹參的水溶性有效成分，屬酚酸類化合物。目前研究較多的有總丹酚酸（totalsalvianolic acid）、丹酚酸A（salvianolic acid A, SalA）和丹酚酸B（salvianolic acid B, SalB）。

丹酚酸B為水溶性化合物，分子式為C₃₆H₃₀O₁₆，相對分子質量為718.62。丹酚酸B也是丹酚酸的最主要成份。具有抗氧化、保護心臟、保護腦、纖維化、抗腫瘤等作用。下圖為丹酚酸B結構式：

中國藥典（2015版）中對丹參中的丹酚酸B檢測作出了規定。RephiLe根據藥典與相關文獻推出丹酚酸B含量檢測解決方案。該方案采用HPLC檢測。詳細解決方案如下：

一、實驗方法

高效液相色譜法（HPLC）

二、儀器和試劑

高效液相色譜儀，PURIST Pro超純水系統

丹酚酸B標注品

三、試驗方法

1、色譜條件

采用C18色譜柱，A相為乙腈，B相為0.05%磷酸水，梯度線性改變：0 min：19% A，81% B；15 min：23% A，77% B；30 min：25% A，75% B；40 min：90% A，10% B。檢測波長：286 nm，流速 1.1 mL/min；柱溫30℃，進樣體積20 μL。

2、標準品溶液配制

使用PURIST Pro產超純水，精準配置濃度為1000 μg/mL的丹酚酸B水溶液，置于棕色容量瓶中。

3、樣品溶液制備

稱取0.15 g樣品粉末置于三角瓶中，加入PURIST Pro產超純水50 mL，超聲處理15 min，過濾，精密量取濾液5 mL，移至10 mL容量瓶中，超純水定量至刻度。用0.45 μm的 RephiQuik PES針頭式過濾器過濾后得試液。

4、標準曲線

分別精密吸取1000 μg/mL 標準溶液 0.20 mL、0.40 mL、0.80 mL、1.60 mL、2.00 mL于10 mL容量瓶中，用PURIST Pro超純水定容。分別進樣進行HPLC分析，然后以峰面積為縱坐標，以丹酚酸B的含量為橫坐標，繪制標準曲線。

5、試樣測定

吸取10 μL試液進行HPLC分析，測定其峰面積，從標準曲線計算得試液中丹酚酸B的含量。

6、結果計算

HPLC檢測所需要的試劑都應該是色譜純的試劑，純水也不例外。樂楓提供的PURIST Pro超純水系統以純水為進水，生產超純水，水質達到或超過GB/T 6682-2008的一級水標
準和GB/T 33087-2015的高純水標準。

關于PURIST Pro超純水儀：

1. 使用兩組大容量雙管純化柱，配合樂楓提供的最全系列的配方填料，靈活組合，精準滿足用戶的特定需求。樂楓的純化柱耗材包含低有機物型、低硼型、ICP型、低鎂型等，適合HPLC、GC-MS、ICP-MS等高要求的儀器用水需求。

2. PURIST Pro采用全氧化法在線檢測TOC，不但滿足中國藥典要求，也符合ISPE及USP對TOC檢測方式必須通過基于完全氧化法設計的規定。

3. PURIST Pro 可配無線遠程控制Rephiblue APP，遠程查詢純水系統運行狀態，追溯水質歷史數據，而且可進行取水分賬號管理，最多可設立10個獨立賬戶，滿足現代實驗室科學管理實驗用水，精準核算科研項目成本的要求。

另外，樂楓可提供各類標準所需的中英文3Q 認證和全套驗證程序：IQ（安裝確認），OQ（操作確認），PQ（性能確認）以及GMP、GLP環境下的維護程序，滿足制藥企業對于驗證服務的需求。樂楓還可提供Direct-Pure EDI或Direct-Pure RO純水系統配合PURIST Pro使用，為其提供合格的純水，并滿足實驗室的日常清洗等使用。

通常試液上樣前需要過濾，除掉試液內的顆粒及微生物，防止色譜柱堵塞、損壞泵等情況發生，保證儀器的操作性能及延長儀器使用壽命。樂楓提供PES、Nylon、PTFE等多種針頭式過濾器，適用于各種水相及有機相的樣品過濾，保證用戶安全使用儀器。

關于上海樂楓生物科技有限公司

上海樂楓專業從事高端水純化和實驗室分離純化產品的研發、設計和制造，致力于，為生命科學和生物技術提供精銳品質、高附加值的創新產品。樂楓產品線包括實驗室純水系統、密理博純水兼容耗材和實驗室分離純化產品。成立十年，樂楓創立出了自己的品牌RephiLe（瑞楓），擁有30多項ZL和多個軟件著作權。產品銷往全球近90個國家和地區。

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