新型離心技術（二）

2．快速純憶質粒DNA（脫氧核糖核酸）

離心色層吸附柱（Horaprep p-DNA）設備是用來純化和恢復在細菌染色體中的雙鏈質粒DNA的。這個離心柱的方法令人注目地代替了使用溴乙錠一氯化銫的密度梯度的純化法，并且宣告了不再需要超速離心而可實現全部離心操作過程：收集細菌、制備澄清的溶菌液、制備粗的質粒DNA和zui終純化質粒。

用離心色層柱Heraprep p-DNA制備的質粒ONA有著可與溴乙錠一氯化銫密度梯度純化的質粒相媲美的純度。廣泛地檢測了用離心色層柱Heraprep p-DNA純化的質粒DNA，證明其純度適用于限制性內切酶分析、連接、轉染哺乳動物細胞和轉化細菌。此外，大小由2．7kb到至少23kb的質粒DNA都可以用Heraprep

p DNA柱來純化。

Heraprep P—DNA離心色層柱還包括1個處理管和1個收集管。一旦制備好粗的質粒DNA，并且將它懸浮于1．8ml的10ml TrisHCL，pH值為8．0，lmM EDTA，IM NaCI溶液中時，樣品就可以在Heraprep P—DNA柱中離心了。

在啟用這根柱時，除去其頂部與底部的封口，排去過量的平衡緩沖液。然后將柱放在1根收集管中．裝入16ml的套簡，在HSA7．290不平轉頭中， 1 100×g離心lmin，這根柱就作好使用準備了

收集到的流出液和收集管一起丟掉。樹脂在上部的柱支撐物之下壓縮了大約lcm是正常的。

樣品的體積是1．8ml。樣品必須十分小心地加到樹脂床的支撐物上面去。

柱和收集管這一套裝置在2O℃下，以2 430r／min（1 100Xg）的速度離心25min

向含有純化質粒的流出液中加入0．6體積的異丙醇，顛飼一下加以混合，室溫下20min。

在2O℃ 下，用HFA 固定角轉頭22．5O，以l 000r／min（1 200×g）的速度離心30min回收質粒DNA。用冷的70 乙醇洗質粒DNA1次，真空抽干并懸浮于適當的緩沖液中。

雖然，高速轉頭的種類還可以由一些特殊型式來進一步擴充，例如連續流量式和洗滌式轉頭等，但是，現有的轉頭及其附件已經能夠應付所有的離心任務了，并且典型地屬于超速離心任務 試樣的容器和常用的以及商業上通用的容器是一樣的