質譜條件
質譜系統： 沃特世ACQUITY? TQD
軟件： 沃特世MassLynxTM 4.1
三聚氰胺
離子化模式： ESI+
毛細管電壓： 3.50 kV
三聚氰酸
離子化模式： ESI-
毛細管電壓： 3.00 kV
源溫度： 150℃
脫溶劑氣溫度： 400℃
錐孔氣流速： 50 L/小時
脫溶劑氣流速： 900 L/小時
碰撞氣流速： 0.15 mL／分鐘
包括同位素內標在內，每個化合物有2個離子通道。第二個通道用于確認，峰面積的比例必須與實際標準品的相匹配才能被認定結果呈陽性。
結果和討論
三聚氰胺和三聚氰酸的校準曲線通過目標化合物和同位素內標的響應比相對于目標化合物濃度而生成。三聚氰胺（0.25
- 40.0ng/mL）和三聚氰酸（0.50
-80.0ng/mL）的校準曲線均呈線性，儀器得到的相關系數（R2）均大于0.99。三聚氰胺和三聚氰酸的校準殘差均低于10%。典型的校準曲線和殘差圖如圖2所示
該方法的精準性是通過在方法定量限濃度上對代表性樣品和配料加標進行評估。成品加標量為0.083μg/g三聚氰胺和0.568μg/g三聚氰酸。原料加標量為0.416μg/g三聚氰胺和1.26μg/g三聚氰酸。三聚氰胺和三聚氰酸的回收率均介于90 - 110%之間，四天內由多位分析員用兩臺儀器得出的八次獨立測定結果的相對標準偏差的平均值幾乎都< 10%。結果匯總于表1。
方法檢出限（MDL）和方法定量限（MQL）根據40CFR第136部分附錄B所述的方法進行確定。檢出限根據所測定濃度的標準差計算得出，定量限被定義為檢出限的三倍。在8天內用兩臺儀器分別對加標樣品進行分析后，三聚氰胺和三聚氰酸的方法定量限分別被確定為0.039μg/g和0.105μg/g。由于原料分析需要進行稀釋，因此檢出限大約高出10倍。
串聯質譜可在選擇反應監測（或多反應監測）模式下進行選擇性檢測。在這種運行模式下，僅可檢出特定母離子/子離子對的化合物。如圖3所示，三聚氰胺的產物離子光譜包含兩個子離子。
在三聚氰胺分析中同時監測兩個MS/MS通道而使得方法專一性增強。如果在127→85和127→68
MRM色譜圖中存在相同色譜峰，并且該峰的響應比必須在所得到的標準品響應比的20%以內，那么可以鑒定出三聚氰胺陽性的結果。標準品（0.25ng/mL三聚氰胺和2.0ng/mL三聚氰酸）、一種非強化型嬰兒配方奶粉和一種強化型嬰兒配方奶粉（0.083μg/g三聚氰胺和0.568μg/g三聚氰酸）的典
型色譜圖如圖4所示。
使用同位素內標可大大增強該方法的定量能力和耐用性。通過這種簡單稀釋和進樣程序，每天僅使用ACQUITY
TQD即可對100多份樣品是否存在三聚氰胺和三聚氰酸進行檢測。經證實，該方法適合分析95%以上的嬰兒配方奶粉、營養品和蛋白粉樣品。在其他情況下，或者對有共流出干擾的復雜基質，應采用一個包括陽離子或陰離子交換SPE的固相萃取（SPE）步驟。
結論
現已開發出一種用于同時測定液體和粉末狀嬰兒配方奶以及成人營養品中三聚氰胺和三聚氰酸的快速而耐用的方法，并根據40
CFR第136部分進行了驗證。成品中三聚氰胺的檢出限和定量限分別為0.013μg/g和0.039μg/g，三聚氰酸相應為0.035μg/g和0.105μg/g。對于加標樣品（n=48、8天、兩臺儀器）而言，三聚氰胺（0.083μg/g）的平均回收率和精確度為100.9%，相對標準差6.8%；三聚氰酸（0.568μg/g）為99.1%，相對標準差10.4%。
簡單稀釋后，配備TQ檢測器的ACQUITY
UPLC系統可同時對三聚氰胺和三聚氰酸進行快速分析（不到6分鐘）。UPLC?與串聯質譜檢測相結合提供了卓越的靈敏度和每天分析超過100份樣品的高通量。同位素內標的加入在較寬的濃度范圍內和各種產品類型中提供了良好的線性和定量效果，從而使三聚氰胺和三聚氰酸的鑒定和定量結果可信。
所述方法具有快速篩查包括嬰兒配方奶粉的蛋白原料、奶源和營養品的能力，從而可確保生產商和監管機構能保證產品的安全性和完整性。
參考文獻
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