流感病毒的形態及實驗室分離純化

引起人類流感的病毒是冠狀病毒。冠狀病毒只感染脊椎動物。
??感染流感病毒后會引起人與動物的呼吸道、消化道與神經系統病患。
??流感病毒的代表型在上世紀 60年代被查明， 60年代后對各種流感病毒的完整形態已進行了深入研究。冠狀病毒的基因圖譜序列（包括各種蛋白酶和病毒內部的核甘酸序列）已被查明。
??流感致病病毒幾何尺寸：平均直徑 100～200nm沉降系數約為 700S~800S。
??病毒（全病毒）在蔗糖液中浮密度約為 1.15～1.19g/ml
??病毒形態：近似球形，中心部分核酸，最外部為纖突，是血凝素（HA）和神經氨酸酶（NA）的大分子，它附著在具有保護作用的脂質膜上，纖突是病毒侵害人體細胞時附著道細胞上的吸附器，也是中和抗體的抗原。這二種表面抗原可以獨立或同時發生變異。 HA的變異性很強，是流感發生變異的主要原因。脂質膜內依次是膜蛋白、螺旋殼膜子粒、核酸鏈。
??核酸：流感病毒的核酸為雙股線型 RNA，同種冠狀病毒的核酸序列是恒定的，但病毒發生變異后，核酸與蛋白的序列會發生某些微小變異。
??病毒如何侵入人與動物細胞：纖突吸附到細胞膜上→病毒 RNA進入人體寄主細胞→病毒核酸復制→病毒蛋白合成（包括病毒殼膜及子粒），病毒的 RNA既可以直接作為 mRNA也可以轉錄形成一個互補的 RNA股。病毒進入寄主細胞后其信息通過人體細胞生物合成機制提供產能系統、核蛋白體、氨基酸活化酶、 tRNA和其他成分來指導合成一系列病毒蛋白。接著，病毒自身作為復制模板在特異聚合酶作用下復制，并用上述由病毒核酸指導合成的病毒蛋白集合成殼膜，組成一個新的病毒顆粒。
??流感病毒由多個基因組片段分節段構成，在感染細胞時，病毒基因組片段可發生重組。產生數百種遺傳學不同的重組子病毒亞型。這些重組病毒亞型具有父母代雙方的 RNA片段，而且多種不同的抗原變異株或重組子病毒可同時在脊椎動物中循環存在，在適應過程中通過基因重排，交換或功能互補使其致病力發生改變，從而導致新的流行病毒株的出現。
??全病毒分離純化：培養液經層析、超濾或高速連續流離心得到濃縮全病毒的上清液。小容量可用超速離心機，最高轉速為 40,000rpm的甩平轉頭，10～50％或類似蔗糖梯度作等密度離心 30,000rpm~35,000rpm，1～2小時，5℃。病毒應沉降在 30％～40％蔗糖梯度之間的某個位置形成純病毒區帶。用密度梯度儀（如日立 DGF-U）把管中液體自上而下用管道泵自動抽樣接至分光光度計流動池進行光密度連續檢測，經部分收集器分部收集并給出從管上部液面到管底的容量——光密度曲線，從曲線的尖峰位置確定病毒所在的收集離心管編號（每個離心管分批收集成 50～100管）。經透析及其他處理后得到純病毒濃縮液。
??病毒裂介后純化處理：用 Triton X-100或乙醚裂介后高速離心濃縮抗原蛋白，然后用超速離心機作密度梯度離心純化。
??中試和批量生產：根據生產規模可用低速大容量離心機或高速管式離心機或高速離心機高速連續流轉頭、大容量層析、超濾設備、超速區帶離心，超速連續流離心直至大容量超速連續流離心機作最后分離純化。