我們在進行分子生物學實驗，常需要對DNA片段進行酶切。在此，我們對酶切實驗中遇到的一些問題做了相應歸納。
帶型 | 原因 | 結果分析 |
DNA完全沒有被內切酶切割 | 內切酶失活 | 標準底物檢測酶活性 |
DNA不純，含有SDS，酚，EDTA等內切酶抑制因子 | 將DNA過柱純化，乙醇沉淀DNA | |
條件不適（試劑、溫度） | 檢查反應系統是否最佳 | |
DNA酶切位點上的堿基被甲基化 | 換用對DNA甲基化不敏感的同裂酶酶解，重新將質粒DNA轉化至dcm-，dam-基因型的細菌菌株 | |
DNA酶切位點上沒有甲基化（如Dpn I） | 換用不同切割非甲基化位點的同裂酶消化DNA（如San3A I代替Dpn I)，重新將質粒轉至dcm+ dam+菌株中擴增 | |
DNA位點上存在其它修飾 | 將DNA底物與λDAN混勻進行切割驗證 | |
DNA不存在該酶識別順序 | 換用其它的酶切割DNA或過量酶消化進行驗證 | |
DNA切割不完全 | 內切酶活性下降 | 用5-10倍量過量消化 |
內切酶稀釋不正確 | 用酶貯藏液或反應緩沖液稀釋酶 | |
DNA不純，反應條件不佳 | 用酶貯藏液或反應緩沖液稀釋酶 | |
內切酶識別的DNA位點上的堿基被甲基化或存在其它修飾 | 用酶貯藏液或反應緩沖液稀釋酶 | |
部分DNA溶液粘在管壁上 | 反應前離心數秒 | |
內切酶溶液粘度大，取樣不準 | 將內切酶稀釋，增大取樣體積 | |
酶切后DNA粘末端退火 | 電泳前將樣品置65℃保溫5-10分鐘，取出后置冰浴驟冷 | |
由于反應溶液、溫度、強烈振蕩使內切酶變性 | 使用標準反應緩沖液及溫度，避免強烈振蕩 | |
過度稀釋使酶活性降低 | 適當稀釋酶液，反應液稀釋的酶不能貯藏 | |
反應條件不適 | 使用最佳反應體系 | |
識別位點兩側插入了可影響酶切效率的核酸順序 | 加大酶量5-10倍 | |
DNA片段數目多于理倫值 | 內切酶星狀活 | 檢查反應條件：甘油濃度大于12%，鹽度過低，Mn2+的存在及酶：DNA值過大均均可導致星狀活性，降低酶的用量 |
其它內切酶污染 | 用λDNA作底物檢查酶切結果 | |
底物中含其它DNA雜質 | 電泳檢查DNA，換用其它酶切，純化DNA片段 | |
酶切后沒有觀察到DNA片段存在 | DNA定量錯誤（如RNA含量較高） | 用RNA酶A（無DNA酶）100ug/ml消化DNA樣，酚抽提后沉淀溶解，定量 |
在酶切反應液中形成非特異的沉淀 | 在反應前透析DNA樣品或用酒精沉淀二次 | |
內切酶保存期內快速失活 | 保存溫度不合適 | 內切酶貯藏在含50%甘油的貯藏液中，應在-20℃低溫保存 |
以稀釋形式保存 | 稀釋酶液不宜長期存放，應一次使用 | |
貯藏緩沖液不適當 | 使用廠家推薦的貯藏緩沖液 | |
低蛋白濃度 | 內切酶與500ug/ml的BSA一起保存 | |
電泳DNA片段帶型彌散不均 | DNA上結合有蛋白質 | 電泳前上樣液65℃加熱5min，并加入0.1%的SDS，酚/氯仿抽提純化 |
內切酶中含有DNA外切酶 | 減少酶用量或消化時間，換用新包裝的酶 | |
酶切后的DNA片段連接效率低 | 含磷酸鹽的濃度高 | 透析，乙醇沉淀去除磷酸鹽 |
內切酶失活不全或含有ATP酶 | 延長滅活時間或用酚抽提，乙醇沉淀回收DNA | |
平末端連接 | 加大T4 DNA Ligase用量 | |
外切酶污染 | 減少酶用量，縮短保溫時間，酚抽提回收DNA | |
連接緩沖液不合適 | 重新配制連接緩沖液 |
美國斯坦福大學醫學院團隊及其國際合作者在《自然》雜志上發表了三篇研究論文，徹底改變了科學界對小DNA環（ecDNA）在人類癌癥中所起作用的理解。這些研究詳細闡述了ecDNA在近15000例癌癥患者中的......
10月25日，“十三五”國家科技重大專項成果——HIV-1DNA載量檢測試劑盒發布會在廣州舉行。據介紹，這是全球首款獲批上市的艾滋病毒DNA載量檢測試劑盒，是廣州海力特生物科技有限公司（以下簡稱“海力......
DNA-RNA三鏈體是雙鏈DNA與單鏈RNA相互作用形成的異源三鏈雜交體，在DNA-RNA三鏈體形成過程中，單鏈RNA與富含嘌呤的雙鏈DNA通過堿基互補配對，利用Hoogsteen氫鍵形成并維持三鏈體......
記者9月29日從天津大學獲悉，該校合成生物學研究團隊與天津市環湖醫院合作提出了一種創新的DNA信息存儲編解碼方案——“DNAPalette”。通過體外存儲實驗，該方案成功將患者疾病全周期的腦部核磁共振......
93年前，時任紅一方面軍第一軍團第三軍軍長的黃公略在江西省吉安市青原區東固畬族鄉六渡坳指揮部隊轉移時，遭敵機襲擊壯烈犧牲。近年，疑似黃公略烈士遺骸在江西省吉安市青原區東固畬族鄉出土。復旦大學科技考古研......
科技日報訊 （記者張夢然）近年來，科研人員雖然在分子療法開發方面取得了重要進展，但新發現的活性物質數量依然不足。現在，美國哈佛大學和瑞士蘇黎世聯邦理工學院共同開發的DNA編碼化學庫（DEL）......
科技日報北京9月10日電 （記者張夢然）德國“3D物質定制”卓越集群、馬克斯普朗克醫學研究所、海德堡大學有機體研究中心和分子生物學中心合作，開發出一種新的分子工程技術。研究團隊利用特定折疊的......
DNA因其標志性的雙螺旋結構而廣為人知。但澳大利亞加文醫學研究所科學家發現，人類基因組還含有超過5萬個不尋常的結狀DNA結構，稱為i-基序。最新一期《EMBO》雜志發表了這些獨特DNA結構的第一張綜合......
DNA雙螺旋結構中伸出的結狀i-基序結構已被定位在人類基因組的50000個位置上，集中在包括控制基因活動的區域在內的關鍵功能區域。圖片來源：加文醫學研究所科技日報北京9月1日電 （記者張夢然......
美國科學家發現了DNA內長期潛伏的“空間語法”，這是理解基因活動如何在人類基因組中編碼的關鍵。這項研究或重塑科學家對基因調控的理解，更深入地揭示遺傳變異如何影響發育或疾病中的基因表達。相關論文發表于《......