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  • 發布時間:2020-08-17 16:02 原文鏈接: 丙酮酸激酶的測定實驗

    實驗方法原理

    PK,ATP:丙酮酸磷酸轉移酶。


    有其他激酶的伴隨,這個反應的直接實驗:



    例如,可以應用 P32 標記。由分光光度測定出,這個反應與 LDH 反應偶聯,繼續 NADH 的氧化反應:


    實驗材料 酶樣品

    試劑、試劑盒 三乙醇胺-HCl KOHKClMgCl2磷酸烯醇式丙酮酸ADPNADHLDH

    儀器、耗材 分光光度計

    實驗步驟

    實驗所需「試劑」具體見「其他」


    0.98 ml 實驗混合物


    0.02 ml 酶樣品


    25 ℃ 時,于 340 nm 處吸收值降低,ε340=6.3×103 l/(mol·cm)。


    注意事項


    其他


    試劑:


    0.1 mol/L 三乙醇胺-HCl/KOH,pH 7.6(氯化三乙醇胺,Mr=185.7;18.6 g 溶于 800 ml H2O,用 1 mol/L KOH 調至 pH 7.6,再補充到 1000 ml)


    0.5 mol/L KCl(Mr=74.6;373 mg 溶于 10 ml 水中)


    0.25 mol/L MgCl2(六水合物,Mr=203.3;508 mg 溶于 10 ml 水中)


    0.01 mol/L 磷酸烯醇式丙酮酸(PEP,三環己基銨鹽,Mr=465.6;46.6 mg 溶于 10 ml 水中)


    0.1 mol/L ADP(二鈉鹽,Mr=471.2;471 mg 溶于 10 ml 水中)


    0.01 mol/L NADH(二鈉鹽,Mr=709.4;71 mg 溶于 10 ml 水中)


    LDH (商業產品有大約 500 U/mg,準備溶液時需 150 U/0.1 ml)


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