實驗方法原理
PK,ATP:丙酮酸磷酸轉移酶。
有其他激酶的伴隨,這個反應的直接實驗:
例如,可以應用 P32 標記。由分光光度測定出,這個反應與 LDH 反應偶聯,繼續 NADH 的氧化反應:
實驗材料 酶樣品
試劑、試劑盒 三乙醇胺-HCl KOHKClMgCl2磷酸烯醇式丙酮酸ADPNADHLDH
儀器、耗材 分光光度計
實驗步驟
實驗所需「試劑」具體見「其他」
0.98 ml 實驗混合物
0.02 ml 酶樣品
25 ℃ 時,于 340 nm 處吸收值降低,ε340=6.3×103 l/(mol·cm)。
注意事項
其他
試劑:
0.1 mol/L 三乙醇胺-HCl/KOH,pH 7.6(氯化三乙醇胺,Mr=185.7;18.6 g 溶于 800 ml H2O,用 1 mol/L KOH 調至 pH 7.6,再補充到 1000 ml)
0.5 mol/L KCl(Mr=74.6;373 mg 溶于 10 ml 水中)
0.25 mol/L MgCl2(六水合物,Mr=203.3;508 mg 溶于 10 ml 水中)
0.01 mol/L 磷酸烯醇式丙酮酸(PEP,三環己基銨鹽,Mr=465.6;46.6 mg 溶于 10 ml 水中)
0.1 mol/L ADP(二鈉鹽,Mr=471.2;471 mg 溶于 10 ml 水中)
0.01 mol/L NADH(二鈉鹽,Mr=709.4;71 mg 溶于 10 ml 水中)
LDH (商業產品有大約 500 U/mg,準備溶液時需 150 U/0.1 ml)