7.探針的制備
1.在1.5ml離心管中配制以下反應液：
模板DNA(25 ng) 1ul
Random Primer 2ul
滅菌水 11ul
總體積：14ul
2.95°C加熱3分鐘后，迅速放置于冰冷卻5min。
3.在離心管中按下列順序加入以下溶液：
10×Buffer 2.5ul
dNTP Mixture 2.5ul
111 TBq/mmol[a-32P]dCTP 5 ul
Exo-free Klenow Fragment 1 ul
4.混勻后（25ul），37°C下反應30分鐘。短暫離心，收集溶液到管底。
5.65°C加熱5min使酶失活。
8.探針的純化及比活性測定：
1.準備凝膠：將1g凝膠加入30ml的DEPC水中，浸泡過夜。用DEPC水洗滌膨脹的凝膠數次，以除去可溶解的葡聚糖。換用新配制的TE（PH7.6）。
2.取1ml一次性注射器，去除內芯推捍，將注射器底部用硅化的玻璃纖維塞住，在注射器中裝填 Sephadex G-50凝膠。
3.將注射器放入一支15ml離心管中，注射器把手架在離心管口上。1600g離心4分鐘，凝膠壓緊后，補加 Sephadex G-50凝膠懸液，重復此步直至凝膠柱高度達注射器0.9ml刻度處
4.100ul STE緩沖液洗柱，1600g離心4min。重復3次。
5.倒掉離心管中的溶液后，將一去蓋的1.5ml離心管置于管中，再將裝填了 Sephadex G-50凝膠的注射器插入離心管中，注射器口對準1.5ml離心管。
6.將標記的DNA樣品加入25 ul STE，取出0.5ul點樣于DE8 paper上，其余上樣于層析柱上。
7.1600g離心4min，DNA將流出被收集在去蓋的離心管中，而未摻入DNA的dNTP則保留在層析柱中。取0.5ul己純化的探針點樣于DE8-paper.
8.測比活性(試劑比活要求:106cpm/ml）。
9.預雜交：
1.將預雜交液在雜交爐中68℃預熱，并漩渦使未溶解的物質溶解。
2.加入適當的ULRAhyb到雜交管中(以100cm2 膜面積加入10mlULRAhyb雜交液)，42℃預雜交4 hr。
10.探針變性：
1.用10 mM EDTA將探針稀釋10倍。
2.90℃熱處理稀釋后探針10min后，立即放置于冰上5min。
3.短暫離心，將溶液收集到管底。
11.雜交：
1.加入0.5ml ULTRAhyb到變性的探針中，混勻后，將探針加到預雜交液中。
2.42℃雜交過夜（14~24hr）。
雜交完后，將雜交液收集起來于－20℃保存。
12.洗膜：
1.低嚴緊性洗膜：加入Low Stringency Wash Solution#1 (100cm2膜面積加入20ml洗膜溶液)，室溫下，搖動洗膜5min兩次。
2.高嚴緊性洗膜： 加入High Stringency Wash Solution#2 (100cm2膜面積加入20ml洗膜溶液)，42℃ 搖動洗膜20min兩次。
13.曝光：
1.將膜從洗膜液中取出，用保鮮膜包住，以防止膜干燥。
2.檢查膜上放射性強度，估計曝光時間
3.將X光底片覆蓋與膜上，曝光
4.沖洗X光底片，掃描記錄結果。
14.去除膜上的探針：將200ml 0.1%SDS（由DEPC水配制）煮沸后，將膜放入，室溫下讓 SDS冷卻到室溫，取出膜，去除多余的液體，干燥后，可以保存幾個月。
15.雜交結果
操作應該小心，但不必緊張。用于RNA電泳、轉膜的所有器械、用具均須處理以除去RNAse 酶，以免樣品的降解。轉膜時，注意膜和多孔滲水屏之間不要有氣泡