NorthernBlot實驗儀器試劑和方法步驟（2）
7.探針的制備1.在1.5ml離心管中配制以下反應液：模板DNA(25 ng) 1ulRandom Primer 2ul滅菌水 11ul總體積：14ul2.95°C加熱3分鐘后，迅速放置于冰冷卻5min。3.在離心管中按下列順序加入以下溶液：10×Buffer 2.5uldNTP Mixture 2.5ul111 TBq/mmol[a-32P]dCTP 5 ulExo-free Klenow Fragment 1 ul4.混勻后（25ul），37°C下反應30分鐘。短暫離心，收集溶液到管底。5.65°C加熱5min使酶失活。 8.探針的純化及比活性測定：1.準備凝膠：將1g凝膠加入30ml的DEPC水中，浸泡過夜。用DEPC水洗滌膨脹的凝膠數次，以除去可溶解的葡聚糖。換用新配制的TE（PH7.6）。2.取1ml一次性注射器，去除內芯推捍，將注射器底部用硅化的玻璃纖維塞住，在注射器中裝填 Sephadex G-50凝膠......閱讀全文
Northern Blot實驗儀器試劑和方法步驟（2）
7.探針的制備1.在1.5ml離心管中配制以下反應液：模板DNA(25 ng) 1ulRandom Primer 2ul滅菌水 11ul總體積：14ul2.95°C加熱3分鐘后，迅速放置于冰冷卻5min。3.在離心管中按下列順序加入以下溶液：10×Buffer 2.5uldNTP Mixtu
Northern Blot實驗儀器試劑和方法步驟（1）
[儀器、試劑、材料]（一）儀器恒溫水浴箱，電泳儀，凝膠成像系統，真空轉移儀，真空泵，UV 交聯儀，雜交爐，恒溫搖床，脫色搖床，漩渦振蕩器，分光光度計，微量移液器，電爐（或微波爐），離心管，燒杯，量筒，三角瓶，等。（二）材料總RNA樣品或mRNA樣品，探針模板DNA(25 ng)，尼龍膜（三）試劑No
Northern blot實驗操作步驟（2）
二、將變性RNA轉移至硝酸纖維素濾膜電泳完畢后，可立即將乙醛酰RNA自瓊脂糖凝膠轉移至硝酸纖維素濾膜，有以下幾種轉移方法：毛細管洗脫法、真空轉移法和電印跡法。毛細管洗脫法如下所述， 真空轉移法和印跡法則按有關儀器生產廠家產品說明書進行。盡管有人認為在轉移前對瓊脂糖凝膠進行預處理實屬不必（Th
Northern Blot實驗方法步驟
實驗概要本文介紹了Northern Blot實驗儀器試劑和方法步驟。實驗原理在變性條件下將待檢的RNA樣品進行瓊脂糖凝膠電泳，繼而按照同Southern Blot相同的原理進行轉膜和用探針進行雜交檢測。用途：檢測樣品中是否含有基因的轉錄產物（mRNA）及其含量。主要試劑1. NorthernMax
Northern blot實驗操作步驟（1）
一、經乙二醛和二甲基亞砜變性處理后進行的RNA電泳這一方法原于McMaster和Carmichael（1977）。含有乙二醛－DMSO的凝膠比含有甲醛的凝膠更難于進行電泳，因為前者泳動速率較慢而且需將電泳液時行循環以避免電泳過程中形成過高的H+梯度。盡管上述兩種凝膠具有近乎相等的分辨率（Miller
Northern Blot實驗方法
[儀器、試劑、材料]（一）儀器恒溫水浴箱，電泳儀，凝膠成像系統，真空轉移儀，真空泵，UV 交聯儀，雜交爐，恒溫搖床，脫色搖床，漩渦振蕩器，分光光度計，微量移液器，電爐（或微波爐），離心管，燒杯，量筒，三角瓶，等。?（二）材料總RNA樣品或mRNA樣品，探針模板DNA(25 ng)，尼龍膜（三）試劑N
Northern blot實驗方法
Northern blot 是一種通過檢測RNA的表達水平來檢測基因表達的方法，通過northernblot的方法可以檢測到細胞在生長發育特定階段或者脅迫或病理環境下特定基因表達情況。Northern blot 首先通過電泳的方法將不同的RNA分子依據其分子量大小加以區分，然后通過與特定基因
Northern blot實驗
實驗方法原理 Northern blot的基本概述是將RNA樣品通過變性瓊脂糖凝膠電泳進行分離，再轉移至尼龍膜等固相膜載體上，用放射性或非放射性標記DNA或RNA特異性探針對固定于固相膜上的mRNA進行雜交，洗膜去除非特異性結合雜交信號，經放射自顯影或現色反應，對雜交信號進行分析。將雜交的m
Northern blot實驗
Northern blot技術 Northern Blot ? ? ? ? ? ? 實驗方法原理 將RNA樣品通過變性瓊脂糖凝膠電泳進行分離，再轉移至尼龍膜等固相膜載體上，
Northern blot實驗（二）
實驗方法原理在變性條件下將待檢的RNA樣品進行瓊脂糖凝膠電泳，繼而按照同Southern Blot相同的原理進行轉膜和用探針進行雜交檢測。實驗材料總RNA樣品或mRNA樣品探針模板DNA(25 ng)尼龍膜試劑、試劑盒NorthernMax Kit（Cat. # 1940AmbionInc.）瓊脂糖