一、原理
金免疫技術是免疫標記技術之一，金鹽被還原成原子金后形成金顆粒懸浮（膠體金），這種金顆粒呈紅色，并能與蛋白質等大分子物質結合，因此，可用膠體金作為標記物來檢測標本中的抗原或抗體。典型的測定方法有斑點買免疫滲濾試驗和斑點免疫層析試驗等。
二、材料
1 、HCG金標試紙條
2、妊娠尿液 正常尿液
三、方法
（一） 膠體金的制備
根據不同的還原劑可以制備大小不同的膠體金顆粒。常用來制備膠體金顆粒的方法如下。
1．枸櫞酸三鈉還原法
（1）10nm膠體金粒的制備：取0.01％HAuCl4水溶液100ml，加入1％枸櫞酸三鈉水溶液3ml，加熱煮沸30min，冷卻至4℃，溶液呈紅色。
（2）15nm膠體金顆粒的制備：取0.01％HAuCl4水溶液100ml，加入1％枸櫞酸三鈉水溶液2ml，加熱煮沸15min～30min，直至顏色變紅。冷卻后加入0.1Mol/L K2CO30.5ml，混勻即可。
（3）15nm、18nm～20nm、30nm或50nm膠體金顆粒的制備：取0.01％HAuCl4水溶液100ml，加熱煮沸。根據需要迅速加入1％枸櫞酸三鈉水溶液4ml、2.5ml、1ml或0.75ml，繼續煮沸約5min，出現橙紅色。這樣制成的膠體金顆粒則分別為15nm、18～20nm、30nm和50nm。
（二） 膠體金標記蛋白的制備
膠體金對蛋白的吸附主要取決于pH值，在接近蛋白質的等電點或偏堿的條件下，二者容易形成牢固的結合物。如果膠體金的pH值低于蛋白質的等電點時，則會聚集而失去結合能力。除此以外膠體金顆粒的大小、離子強度、蛋白質的分子量等都影響膠體金與蛋白質的結合。
1．待標記蛋白溶液的制備 將待標記蛋白預先對0.005Mol/L pH7.0 NaCl溶液中4℃透析過夜，以除去多余的鹽離子，然后100 000g4℃離心1h，去除聚合物。
2．待標膠體金溶液的準備 以0.1Mol/L K2CO3或0.1Mol/L HCl調膠體金液的pH值。標記IgG時，調至9.0，由于膠體金溶液可能損壞pH計的電板，因此，在調節pH時，采用精密pH試紙測定為宜。
3．膠體金與蛋白質（IgG）的結合 將膠體金和IgG溶液分別以0.1Mol/L
K2CO3調pH至9.0，電磁攪拌IgG溶液，加入膠體金溶液，繼續攪拌10min，加入一定量的穩定劑以防止抗體蛋白與膠體金聚合發生沉淀。常用穩定劑是5％胎牛血清（BSA）和1％聚乙二醇（分子量20KD）。加入的量：5％BSA使溶液終濃度為1％；1％聚乙二醇加至總溶液的1／10。
4．膠體金標記蛋白的純化
超速離心法：根據膠體金顆粒的大小，標記蛋白的種類及穩定劑的不同選用不同的離心速度和離心時間。
用BSA做穩定劑的膠體金—羊抗兔IgG結合物可先低速離心（20nm金膠粒用1 200r/min，5nm金膠粒用1
800r/min）20min，棄去凝聚的沉淀。然后將5nm膠體金結合物用6 000g，4℃離心1h；20nm～40nm膠體金結合物，14
000g，4℃離心1h。仔細吸出上清，沉淀物用含1％BSA的PB液（含0.02％NaN3），將沉淀重懸為原體積的1／10，4℃保存。如在結合物內加50％甘油可貯存于-18℃保存一年以上。
為了得到顆粒均一的免疫金試劑，可將上述初步純化的結合物再進一步用10％～30％蔗糖或甘油進行密度梯度離心,分帶收集不同梯度的膠體金與蛋白的結合物。
5．膠體金蛋白結合物的質量鑒定
（1）膠體金顆粒平均直徑的測量：用支持膜的鎳網（銅網也可）蘸取金標蛋白試劑，自然干燥后直接在透射電鏡下觀察。或用醋酸鈾復染后觀察。計算100個金顆粒的平均直徑。
（2）膠體金溶液的OD520nm值測定：膠體金顆粒在波長510nm～550nm之間出現最大吸收值峰。用0.02Mol/L pH8.2
PBS液（含1％BSA，0.02％NaN3）將膠體金蛋白試劑作1︰20稀釋，OD520＝0.25左右。一般應用液的OD520應為0.2～0.4。
（3）金標記蛋白的特異性與敏感性測定：采用微孔濾膜免疫金銀染色法（MF－IGSSA）。將可溶性抗原（或抗體）吸附于載體上（濾紙、硝酸纖維膜、微孔濾膜），用膠體金標記的抗體（或抗原）以直接或間接染色法并經銀顯影來檢測相應的抗原或抗體，對金標記蛋白的特異性和敏感性進行鑒定。
6、試驗驗證
將白色一端插入尿液中，尿液面不超過Max線，5秒鐘后取出平放，3min內觀察結果。
四、結果
出現一條紅線者為妊娠試驗陰性，出現兩條紅線者為妊娠試驗陽性，如無紅線出現，表明試紙條失效。