金免疫技術（斑點免疫層析試驗）
一、原理金免疫技術是免疫標記技術之一，金鹽被還原成原子金后形成金顆粒懸浮（膠體金），這種金顆粒呈紅色，并能與蛋白質等大分子物質結合，因此，可用膠體金作為標記物來檢測標本中的抗原或抗體。典型的測定方法有斑點買免疫滲濾試驗和斑點免疫層析試驗等。二、材料1 、HCG金標試紙條2、妊娠尿液 正常尿液三、方法（一） 膠體金的制備根據不同的還原劑可以制備大小不同的膠體金顆粒。常用來制備膠體金顆粒的方法如下。1．枸櫞酸三鈉還原法（1）10nm膠體金粒的制備：取0.01％HAuCl4水溶液100ml，加入1％枸櫞酸三鈉水溶液3ml，加熱煮沸30min，冷卻至4℃，溶液呈紅色。（2）15nm膠體金顆粒的制備：取0.01％HAuCl4水溶液100ml，加入1％枸櫞酸三鈉水溶液2ml，加熱煮沸15min～30min，直至顏色變紅。冷卻后加入0.1Mol/L K2CO30.5ml，混勻即可。（3）15nm、18nm～20nm、30nm或50nm膠體金顆......閱讀全文
免疫金染色
中文名稱免疫金染色英文名稱immuno-gold staining定 義將用膠體金（直徑大于20 nm）標記的間接抗體或A蛋白再與特異性抗體結合，在光鏡下就可見紅色的反應物出現，不需進行呈色反應的方法。應用學科細胞生物學（一級學科），細胞生物學技術（二級學科）
免疫金銀染色
中文名稱免疫金-銀染色英文名稱immuno-gold-silver staining;IGSS定 義使已在抗原位置沉積的金顆粒發揮催化作用，促進銀離子被氫醌還原為銀原子，后者圍繞金顆粒形成一層銀殼，利用膠體金和膠體銀的雙重標記抗體對抗原進行染色的方法。增強了檢測靈敏度。應用學科細胞生物學（一級學科
金免疫層析試驗
????? 1．原理 金免疫層析試驗（dot immunogold chromatographic assay，DICA）是用膠體金標記技術和蛋白質層析技術結合的以微孔濾膜為載體的快速的固相膜免疫分析技術。本項技是將各種反應試劑分點固定在試紙條上，檢測標本加在試紙條的一端，通過毛細血管作用使
金免疫技術（斑點免疫層析試驗）
一、原理金免疫技術是免疫標記技術之一，金鹽被還原成原子金后形成金顆粒懸浮（膠體金），這種金顆粒呈紅色，并能與蛋白質等大分子物質結合，因此，可用膠體金作為標記物來檢測標本中的抗原或抗體。典型的測定方法有斑點買免疫滲濾試驗和斑點免疫層析試驗等。二、材料1 、HCG金標試紙條2、妊娠尿液 正常尿液三、方法
常用的免疫膠體金檢測技術斑點免疫金滲濾法
斑點免疫金滲濾法應用微孔濾膜（如膜）作載體，先將抗原或抗體點于膜上，封閉后加待檢樣本，洗滌后用膠體金標記的抗體檢測相應的抗原或抗體。
常用的免疫膠體金檢測技術膠體金免疫層析法
膠體金免疫層析法將特異性的抗原或抗體以條帶狀固定在膜上，膠體金標記試劑（抗體或單克隆抗體）吸附在結合墊上，當待檢樣本加到試紙條一端的樣本墊上后，通過毛細作用向前移動，溶解結合墊上的膠體金標記試劑后相互反應，再移動至固定的抗原或抗體的區域時，待檢物與金標試劑的結合物又與之發生特異性結合而被截留，聚集在
組織切片的免疫金標記
實驗方法原理利用膠體金在堿性條件下帶負電荷的性質，與蛋白質分子的正電荷基團籍靜電吸引而形成牢固結合。除抗體外，膠體金還可與其它多種生物大分子，如SPA、PHA、ConA等結合。實驗材料組織樣品試劑、試劑盒免疫金標記物儀器、耗材培養箱顯微鏡實驗步驟1. ?將濕紙巾鋪于載玻片盒底部做成加濕盒，由冰凍切片
怎么樣制備免疫金？
(一)制備原理：蛋白質被吸附到膠體金顆粒表面而結合的過程。(二)技術要點1.膠體金溶液的pH：原則上可選擇待標記蛋白質等電點，也可略為偏堿。2.蛋白質最適標記量(三)注意事項多種蛋白質、葡聚糖、PEG2000、明膠等均為良好的高分子穩定劑，PEG和BSA是最常用的穩定劑。穩定劑有兩大作用：①為保護膠
免疫膠體金技術1
（一） 原理 免疫膠體金技術是以膠體金作為示蹤標志物應用于抗原抗體的一種新型的免疫標記技術。膠體金是由氯金酸（HAuCl4）在還原劑如白磷、抗壞血酸、枸櫞酸鈉、鞣酸等作用下，聚合成為特定大小的金顆粒，并由于靜電作用成為一種穩定的膠體狀態，稱為膠體金。膠體金在弱堿環境下帶負電荷，可與
免疫膠體金技術3
為了得到顆粒均一的免疫金試劑，可將上述初步純化的結合物再進一步用10％～30％蔗糖或甘油進行密度梯度離心,分帶收集不同梯度的膠體金與蛋白的結合物。（2）凝膠過濾法：此法只適用于以BSA作穩定劑的膠體金蛋白結合物的純化。將膠體金蛋白結合物裝入透析袋，在硅膠中脫水濃縮至原體積的 1／5～1／10。再
免疫膠體金技術簡介
免疫膠體金技術(Immune colloidal gold technique) 是以膠體金作為示蹤標志物應用于抗原抗體的一種新型的免疫標記技術，英文縮寫為：GICT。膠體金是由氯金酸（HAuCl4）在還原劑如白磷、抗壞血酸、枸櫞酸鈉、鞣酸等作用下，聚合成為特定大小的金顆粒，并由于靜電作用成為一種穩
免疫膠體金技術2
（3）配制膠體金溶液的pH以中性（pH7.2）較好。（4）氯金酸的質量要求上乘，雜質少。最好是進口的。（5）氯金酸配成1％水溶液在4℃可保持數月穩定，由于氯金酸易潮解，因此在配制時，最好將整個小包裝一次性溶解。 （三） 膠體金標記蛋白的制備 膠體金對蛋白的吸附主要取決于pH值，在
免疫膠體金技術簡介
免疫膠體金技術(Immune colloidal gold technique) 是以膠體金作為示蹤標志物應用于抗原抗體的一種新型的免疫標記技術，英文縮寫為：GICT。膠體金是由氯金酸（HAuCl4）在還原劑如白磷、抗壞血酸、枸櫞酸鈉、鞣酸等作用下，聚合成為特定大小的金顆粒，并由于靜電作用成為一種穩
斑點金免疫滲濾試驗原理
斑點免疫滲濾試驗的基本原理是：以硝酸纖維素膜為載體，利用微孔濾膜的可濾過性，使抗原抗體反應和洗滌在一特殊的滲濾裝置上以液體滲濾過膜的方式迅速完成。斑點免疫滲濾試驗最初是從斑點ELISA基礎上發展起來建立的，應用的結合物是酶標記的，稱為斑點酶免疫滲濾試驗。90年代初發展了以膠體金為標記物的斑點免疫滲
組織切片的免疫金標記
實驗方法原理 利用膠體金在堿性條件下帶負電荷的性質，與蛋白質分子的正電荷基團籍靜電吸引而形成牢固結合。除抗體外，膠體金還可與其它多種生物大分子，如SPA、PHA、ConA等結合。實驗材料 組織樣品試劑、試劑盒 免疫金標記物儀器、耗材 培養箱顯微鏡實驗步驟 1. ?將濕紙巾鋪于載玻片盒底部做成加濕盒，
金標免疫層析法簡介
金標免疫層析法(goldimmunochromatographicas say，GICA)是20世紀90年代初發展起來的快速免疫分析技術，是一種建立在免疫層析技術、單克隆抗體技術和金納米晶標記技術基礎上的一種固相檢測技術。 金納米晶標記技術是以金納米晶作為示蹤標記物或顯色劑，應用于抗原抗體反應
免疫金標記技術原理
免疫金標記技術原理：膠體金顆粒表面負電荷與蛋白質的正電荷基團因靜電吸附而形成牢固結合。膠體金對蛋白質有很強的吸附功能，蛋白質等高分子被吸附到膠體金顆粒表面，無共價鍵形成，標記后大分子物質活性不發生改變。金顆粒具有高電子密度的特性。金標蛋白在相應的配體處大量聚集時，在顯微鏡下可見黑褐色顆粒或肉眼可見紅
免疫膠體金技術介紹
一、免疫膠體金技術的基本知識1、膠體金的概念氯金酸(HAuCl4)在還原劑作用下，可聚合成一定大小的金顆粒，形成帶負電的疏水膠溶液。由于靜電作用而成為穩定的膠體狀態，故稱膠體金。2、免疫金標記技術膠體金顆粒表面負電荷與蛋白質的正電荷基團因靜電吸附而形成牢固結合。膠體金對蛋白質有很強的吸附功能，蛋白質
免疫電鏡膠體金標記法（簡稱金標法）
1、 包埋后染色 (超薄切片的金標記法)（1）超薄切片厚50～70nm左右，載于200～300網孔的鎳網上；（2）滴1%的H2O2液1滴于蠟板上，將網的載片面輕浮于液滴上10min至1h；（3）雙蒸水洗3次，每次10分鐘。第1、2次洗法如（2），浮于液面上，第3次以盛雙蒸水的注射器沿鎳網面沖洗，水流
免疫組化方法免疫膠體金技術
免疫膠體金技術是以膠體金這樣一種特殊的金屬顆粒作為標記物。膠體金是指金的水溶膠，它能迅速而穩定地吸附蛋白，對蛋白的生物學活性則沒有明顯的影響。因此，用膠體金標記一抗、二抗或其他能特異性結合免疫球蛋白的分子（如葡萄球菌A蛋白)等作為探針，就能對組織或細胞內的抗原進行定性、定位，甚至定量研究。由于膠
免疫膠體金技術的簡介
免疫膠體金技術(Immune colloidal gold technique) 是以膠體金作為示蹤標志物應用于抗原抗體的一種新型的免疫標記技術，英文縮寫為：GICT。膠體金是由氯金酸（HAuCl4）在還原劑如白磷、抗壞血酸、枸櫞酸鈉、鞣酸等作用下，聚合成為特定大小的金顆粒，并由于靜電作用成為一
免疫電鏡膠體金標記法
第四節 免疫電鏡膠體金標記法 金標法是Faulk和Taylor（1971）提出的，并首先用于免疫電鏡。它是利用膠體金在堿性環境中帶有負電的性質，使其與抗體相吸附，從而將抗體標記。當用金標記的抗體與抗原反應時，在光鏡水平膠金液呈現鮮艷的櫻紅色，不需加外進行染色。在電鏡水平，金顆粒具有很高的電子密度，
免疫膠體金技術測試原理
層析法免疫膠體金檢測試劑實際上是免疫金標記技術和抗原抗體反應相結合而形成的一種應用形式，相比ELISA試劑，除標記物不同外，同樣服從于抗原抗體反應的特性。此種檢測方法具有明顯的優點：*方便使用，體現在操作簡單，不需經過特殊培訓。*短時間獲得檢測結果，一般10－15分鐘即可得出結論。*不同環境下的穩定
免疫膠體金的應用特點
1971年Faulk 和Taytor將膠體金引入免疫化學，此后免疫膠體金技術作為一種新的免疫學方法，在生物醫學各領域得到了日益廣泛的應用。在醫學檢驗中的應用主要是免疫層析法( immunochromatography)和快速免疫金滲濾法(Dot-immuogold filtration assay
免疫膠體金技術的應用
膠體金標記技術由于標記物的制備簡便，方法敏感、特異，不需要使用放射性同位素，或有潛在致癌物質的酶顯色底物，也不要熒光顯微鏡，它的應用范圍廣，除應用于光鏡或電鏡的免疫組化法外，更廣泛地應用于各種液相免疫測定和固相免疫分析以及流式細胞術等。 1．液相免疫測定：將膠體金與抗體結合，建立微量凝集試驗檢
斑點金免疫滲濾測定（DIGFA）實驗
實驗方法原理 斑點金免疫滲濾測定法是在斑點免疫滲濾測定法基礎上，改用膠體金標記物代替酶，省去底物顯色的步驟。試驗方法是以硝酸纖維素膜（NC膜）為載體，將試劑及標本滴加在膜上，通過滲濾而逐步反應。全過程可于數分鐘內完成，陽性結果在膜上呈紅色斑點。實驗材料 細胞樣品試劑、試劑盒 PBS吐溫-20BSA
免疫膠體金技術的應用
膠體金標記技術由于標記物的制備簡便，方法敏感、特異，不需要使用放射性同位素，或有潛在致癌物質的酶顯色底物，也不要熒光顯微鏡，它的應用范圍廣，除應用于光鏡或電鏡的免疫組化法外，更廣泛地應用于各種液相免疫測定和固相免疫分析以及流式細胞術等。1．液相免疫測定：將膠體金與抗體結合，建立微量凝集試驗檢測相應的
斑點金免疫滲濾測定（DIGFA）實驗
實驗方法原理斑點金免疫滲濾測定實驗是在斑點免疫滲濾測定法基礎上，改用膠體金標記物代替酶，省去底物顯色的步驟。試驗方法是以硝酸纖維素膜（NC膜）為載體，將試劑及標本滴加在膜上，通過滲濾而逐步反應。全過程可于數分鐘內完成，陽性結果在膜上呈紅色斑點。實驗材料細胞樣品試劑、試劑盒?PBS吐溫-20BSA特異
免疫膠體金的制備過程
1蛋白質的處理:由于鹽類成分能影響金溶膠對蛋白質的吸附,并可使溶膠聚沉,故致敏前應先對低離子強度的水透析。必須注意,蛋白質溶液應絕對澄清無細小微粒,否則應先用微孔濾膜或超速離心除去。一般情況下應避免磷酸根離子和硼酸根離子的存在,因為它們都可吸附于顆粒表面而減弱膠體金對蛋白質的吸附。2蛋白質最適用量的
免疫膠體金(Immune－colloidal－gold)
原理??免疫膠體金技術是以膠體金作為示蹤標志物應用于抗原抗體的一種新型的免疫標記技術。膠體金是由氯金酸（?HAuCl4?）在還原劑如白磷、抗壞血酸、枸櫞酸鈉、鞣酸等作用下，聚合成為特定大小的金顆粒，并由于靜電作用成為一種穩定的膠體狀態，稱為膠體金。膠體金在弱堿環境下帶負電荷，可與蛋白質分子的正電荷基