當外泌體遇上環狀RNA（七）

（3）circPACRGL作為海綿分子結合miR-142-3p和miR-506-3p
作者使用生物信息學數據庫預測發現circPACRGL同時具有miR-142-3p和miR-506-3p的結合位點，雙熒光素酶報告實驗檢測也證實miR-142-3p和miR-506-3p可與circPACRGL直接結合。此外，在CRC細胞來源的外泌體刺激的HCT116和SW480細胞中，miR-142-3p和miR-506-3p表達均顯 著降低。這些結果表明，circPACRGL可以海綿吸附miR-142-3p和miR-506-3p，并抑 制二者的表達。

（4）miR-142-3p / miR-506-3p均可調節 TGF-β1
使用生物信息學預測了miR-142-3p和miR-506-3p的下游靶基因TGF-β1。通過雙熒光素酶報告實驗，證實了TGF-β1是miR-142-3p和miR-506-3p的共同靶基因。qPCR和WB分析進一步表明，轉染miR-142-3p/miR-506-3p可顯 著降低TGF-β1的mRNA和蛋白水平。為了進一步證實miR-142-3p和miR-506-3p對TGF-β1的調節作用，作者使用miR-142-3p/miR-506-3p 處理CRC衍生的外泌體刺激的CRC細胞，結果顯示導入CRC衍生的外泌體后，CRC細胞中TGF-β1的mRNA和蛋白水平均顯 著增加，而與miR-142-3p/miR-506-3p共同處理后，TGF-β1表達的促進作用被有效抑 制。綜上所述，TGF-β1是miR-142-3p和miR-506-3p的共同靶標。

（5）circPACRGL通過海綿機制吸附miR-142-3p /miR-506-3p進而調控TGF-β1促進CRC細胞增殖、遷移和侵襲
根據以上數據，作者推測circPACRGL可能通過miR-142-3p /miR-506-3p-TGF-β1軸來調控CRC細胞增殖、遷移和侵襲。CCK8結果顯示，在CRC衍生的外泌體治 療組（Ex-HCT116）中，CRC細胞增殖明顯高于對照組。敲低circPACRGL顯 著降低了CRC細胞增殖，而miR-142-3p/miR-506-3p抑 制劑處理或過表達TGF-β1后，這種抑 制作用會相應減弱。在細胞凋亡實驗中也觀察到了類似的效果。接下來，劃痕實驗和Transwell分析均顯示CRC衍生的外泌體可以增強CRC細胞的遷移和侵襲能力，而在circPACRGL敲低的細胞中則發生了相反的作用，CRC衍生的外泌體處理可以回補circPACRGL敲低細胞的遷移和侵襲能力。與CCK8和細胞凋亡檢測結果一致，miR-142-3p / miR-506-3p抑 制劑處理或過表達TGF-β1顯著促進了circPACRGL敲低細胞的遷移和侵襲能力。以上結果表明，circPACRGL通過調節miR-142-3p /miR-506-3p-TGF-β1過程促進CRC細胞增殖、遷移和侵襲。

（6）來源于CRC的外泌體circPACRGL通過miR-142-3p /miR-506-3p-TGF-β1過程調節N1-N2中性粒細胞的分化
上述研究表明，circPACRGL通過miR-142-3p/miR-506-3p-TGF-β1過程促進大腸ai的發展。作者進一步探討CRC衍生的外泌體circPACRGL是否也可以通過這個軸調節中性粒細胞的N1-N2分化。流式細胞儀檢測結果顯示，CRC衍生的外泌體可以增加N2中性粒細胞的百分比，這與N2標記物CD11b + / Ly6G + / Ly6Clow的上調相一致。相比之下，在circPACRGL敲低的細胞中，N2中性粒細胞的百分比顯著降低，而加入CRC衍生的外泌體后，這種抑 制作用被取消。此外，miR-142-3p/miR-506-3p抑 制劑處理或過表達TGF-β1可以顯 著增加circPACRGL敲低細胞中N1-N2的分化。綜上分析，CRC衍生外泌體的circPACRGL通過miR-142-3p /miR-506-3p-TGF-β1過程促進N1-N2中性粒細胞的分化。

總結
總體來說，上述三篇研究通過外泌體提取、外泌體鑒定、外泌體環狀RNA測序、qRT-PCR、Sanger測序、RNA pull-down+MS/WB、RIP以及雙熒光素酶報告實驗等方法（云序可提供以上服務），探究外泌體環狀RNA通過海綿機制吸附miRNA進而調控下游疾病相關基因mRNA的表達過程，結果影響ai癥發展進程。這為研究和理解生物體復雜的外泌體環狀RNA調控機制，提供了比較完整的實驗研究思路和方案，具有很強的理論先導性和示范性，也為疾病的調控和靶點提供了重要的理論依據。