單核細胞增生李斯特菌的增菌檢測方法！

單核細胞增生李斯特菌的增菌檢測方法

1、在225mL的Fraser基礎肉湯中分別加入2.25mL無菌氯化鋰溶液、0J3mL尤菌萘啶酮酸鈉鹽溶液、1.12mL無菌吖啶黃溶液和2.25mL無菌檸檬酸鐵銨溶液(詳見附 錄1中培養基及其無菌添加物）。混合后制成50%的Fraser肉湯，加人樣品后置于30C 培養Mh,進行初增菌。

2、①將一環增菌培養物劃線于牛津瓊脂上，另取一環接種于PALCAM瓊脂上平板在35℃或37℃培養48h(牛津瓊脂平板在需氧條件下培養，PALCAM瓊脂平板在第 10.1中描述的微生物需氧條件下培養）。②將0.1mL增菌肉湯轉接到裝有10mL Freser基礎肉揚的試管中，置于35℃或 37℃培養48h，進行二次增菌。

3、按2①中的方法轉接二次增菌液于牛津瓊脂平板和PALCAM平板。

李斯特菌屬快速篩選試驗

使用適當的ELISA試劑盒可以對初次和二次增菌液進行快速檢測，從而對單核細胞增生李斯特菌進行快速篩(如TECRA李斯特菌可視免疫測定法)。

李斯特菌的鑒定和驗證

1、李斯特菌能水解七葉苷，除格氏李斯特菌外，其他李斯特菌均不能分解甘露醇產酸。在牛津瓊脂平板上，李斯特菌菌落直徑為2?3mm，帶有黑褐色或黑色暈輪(七葉苷水解所形成），菌落的中心經常是下凹的；在PALCAM瓊脂匕李斯特菌菌落直徑為 1.5?lnm,綠色并帶有黑色的暈輪(或菌落中心為黑色)。

2、驗證時，挑取5個典型的菌落，每個菌落劃線接種到胰蛋白胨大豆酵母浸膏瓊脂(TSYEA)上，置于MT：或37T：需氧培養24?48h,分離平板上的單個菌落以確保菌株的 純度。

3、檢查TSYEA平板上生氏的單個菌落,使用亨利描述的菌落特征進行分離亨利認為李斯特菌在TYS平板上生成細小的、半透明的菌落，菌落呈藍色、藍綠 色或藍灰色，菌落表面為細小的顆粒狀,類似于粗糙的磨砂玻璃。
從TSYES平板上挑取一個單個的菌落，分別接種于胰蛋白胨大豆酵母浸膏肉湯 (TSYEB)試管和胰蛋白胨大豆酵母浸膏瓊脂(TSYEA)斜面上，25C培養18?24h。

4、①ffl lSYEK肉湯培養物進行菌體運動試驗和革蘭氏染色。李斯特菌屬呈翻筋斗運動，注意與振蕩培養后非致病性李斯特菌的快速直線運動進行區別。李斯特菌為小的、革蘭氏陽性的、無孢子的短桿菌。
②用TSYEB斜而t：的生長物進行過氧化氫酶和氧化酶試驗。李斯特菌過氧化氫 酶試驗陽性，氧化酶試驗陰性o
③用TSYEB培養物接種下列培養基，進行驗證和鑒定試驗：
a.接種D-葡萄糖、D-水楊苷、L-鼠李糖、D-木糖發酵肉湯(含有溴甲酚紫；見附錄1)，置35℃或37℃培養，每天檢查產酸的情況(生化管由紫色變為黃色)。
b.接種硝酸鹽蛋白胨水，檢查硝酸鹽的產生情況。在35℃或37℃培 養5d。
c.使用金黃色葡萄球菌和馬紅球菌進行CAMP試驗(見11,5.3)。在35℃或37℃ 培養24h。
可選用API李斯特菌試劑盒（HoMMeux)。Mdauchlin發現該試劑盒能夠很好地鑒 定和區分不同的李斯特菌種。