細胞因子分子生物學方法

　　這是一類利用細胞因子的基因探針檢測特定細胞因子基因表達的技術。目前所有公認的細胞因子的基因均已克隆化，故能較容易地得到某一細胞因子的cDNA探針或根據已知的核苷酸序列人工合成寡聚核苷酸探針。利用基因探針檢測細胞因子mRNA表達的方法多種多樣，常使用斑點雜交、Northernblot、逆轉錄PCR，細胞或組織原位雜交等。實驗的關鍵在于制備高質量的核酸探針和獲得合格的待測物（提取的mRNA樣品或細胞/組織標本）。核酸探針是指一段用放射性同位素或其他標記物（如生物素、地高辛等）標記并與目的基因互補的DNA片段或單鏈DNA、RNA.根據其來源可分為cDNA探針、寡核核苷酸探針、基因組基因探針及DNA探針等。其中cDNA探針和人工合成寡核苷酸探針常用于斑點雜交及Northernblot，而RNA探針因穿透性好更適用于原位雜交。核酸探針技術的應用已經程序化，以cDNA探針為例主要包括：①質粒DNA的提取；②靶DNA片段的分離；③靶DNA片段標記；④待測樣品mRNA的提取；⑤標記cDNA探針對待檢樣品的雜交；⑥放射自顯影或顯色分析。近年來出現的RT-PCR檢測特異性mRNA的方法也廣泛用于細胞因子研究領域。該法具有靈敏、快速等優點，甚至從1～10個細胞中就可檢出其中的特異mRNA。