1）所需器材：制冰機、標記筆、兩套1.5ml EP管（最好高溫高壓處理）、兩個大冰盒、長滿細胞的培養瓶、10ml離心管、手套、移液槍、吸頭（最好高溫高壓處理）、濾紙、保存于4℃冰箱的PBS（最好高溫高壓處理）、三去污裂解液、苯甲基磺酸氟（PMSF，一種蛋白酶抑制劑，劇毒）、離心機、燒杯、4×SDS凝膠上樣緩沖液、二硫蘇糖醇（DTT）、泡沫板。
2）操作步驟
a.制冰機制冰；
b.標記筆將2套EP管做好標記；
c.將兩個大冰盒裝上冰，標記筆做好標記的兩套EP管置于一個大冰盒上,帶上另一個大冰盒，取出長滿細胞的培養瓶平放在大冰盒上；
d. 戴好手套，將培養瓶細胞懸液吸至10ml離心管，4℃、3000轉離心10分鐘，棄上清，加1ml保存于4℃冰箱的PBS重懸細胞，再轉移細胞懸液至1.5mlEP管中，4℃、3000轉離心10分鐘，棄上清，濾紙盡可能吸干管口殘留液體；
e. 取出保存于4℃冰箱的三去污裂解液、保存于-20℃冰箱的PMSF, 往培養瓶中滴加三去污裂解液（一般為47－141ul/50ml培養瓶）、再加入PMSF（二者比例為94：6），移液槍吹打混勻，冰上靜置15-25分鐘，以上步驟均需在冰上操作；
f.離心機預冷，將靜置15-25分鐘后的EP管4 ℃、10000轉離心10分鐘；
g.將燒杯用自來水洗凈，倒入單蒸水，電爐上煮沸；
h.備好4×SDS凝膠上樣緩沖液（存放在常溫），取出保存于-20℃冰箱的DTT置于冰上，用移液槍將離心后的上清液定量吸至另一套EP管中（勿吸取下層沉淀物），按上清液：4×SDS：DTT=3：0.8:0.2滴加4×SDS及DTT，掌上離心，然后小心將EP管插入泡沫板，投入已煮沸的燒杯中煮6-8分鐘（電爐功率不要調太大，以免管蓋爆開）；
i. 將泡沫板用鑷子夾出，置大冰盒中冷卻10分鐘，掌上離心，再放入-20℃冰箱保存備用。
注意：裂解液也可酌情選用單去污裂解液或細胞裂解液等。
