銅綠假單胞菌耐藥表型分析及MALDITOFMS在其同源性分析

目的：

初步分析我院某科銅綠假單胞菌耐藥表型及評價采用基質輔助激光解析電離飛行時間質譜技術（Matrix-Assisted　Laser　Desorption/　Ionization　Time　of　Flight　Mass　Spectrometry　，MALDI-TOF　MS）的VITEK　MS質譜儀(VITEK　　Mass　Spectrometry　)對銅綠假單胞菌（Pseudomonas　aeruginosa）同源性的分型能力，為快速確定醫院內感染提供實驗室依據。

方法：

對2015年4月至2016年6月西安交通大學第一附屬醫院某科的四個普通病區和重癥監護病房（ICU)分離的35株銅綠假單胞菌進行回顧分析。應用VITEK　2　compact對35株銅綠假單胞菌做藥敏分析，通過分析軟件中AEC專家系統匹配出β-內酰胺酶最典型的耐藥表型。　　用DiversiLab方法對銅綠假單胞菌進行分型，判斷菌株是否具有同源性。以DiversiLab系統的分型結果為準，初步評價VITEK　MS質譜儀對銅綠假單胞菌同源性的分型能力。

結果：

1）35株銅綠假單胞菌藥敏β-內酰胺酶類耐藥表型分別是：野生型占2.9%（1/35）；高水平耐藥占5.7%(2/35)；獲得性青霉素酶占2.9%（1/35）；低水平非酶TICAR耐藥占25.7%（9/35）；高水平R+R碳青霉烯類（不透性）占22.9%(8/35)；碳青霉烯類（METALLO-或OXA占11.4%（4/35）；碳青霉烯類耐藥（不透性）占11.4%（4/35）；碳青霉烯類（METALLO-或OXA）和高水平R+R碳青霉烯類（不透性）混合型占17.1%（6/35）。藥敏MIC耐藥率：IPM和MEM耐藥率為60%(21/35)。　　

2）DiversiLab系統分型結果：按Kullback-Leibler法(KL)以相似度95%為分型標準將35株銅綠假單胞菌分成11個散發菌株和6個不同親緣關系的克隆組：第1組2株細菌；第2組3株細菌；第3組11株細菌第4組3株細菌；第5組2株細菌；第6組2株細菌。其中第3克隆組親緣關系最近，相似度大于95%，是主要的流行株。　　

3）VITEK　MS質譜儀分型結果：將35株銅綠假單胞菌進行聚類分析獲得兩種類型樹狀圖：（1）第一種類型樹狀圖：將35株銅綠假單胞菌以菌株分類值（taxonomy）80%為標準將35株菌株分為2個不同親緣關系克隆組及9個散發菌株，第一克隆組按相似度85%又可再細分為三個亞克隆組和10個散發菌株。（2）第二種樹狀圖：以菌株分類值（taxonomy）70%　為標準將菌株峰質荷比（Identical　masses）分為1個有不同親緣關系的克隆組和9個散發株。　　

4）DiversiLab與VITEK　MS兩種方法比對結果：將DiversiLab系統中5組亞克隆組菌株的樹狀圖及指紋圖譜分別與VITEK　MS質譜儀峰型圖比較發現：①每組細菌樹狀圖和指紋圖譜比較，菌株分型結果吻合；DiversiLab系統相似度均大于95%，VITEK　MS質譜分類值大于70%。②DiversiLab系統中每組中菌株間親緣性水平越高，對應菌株之間質譜圖中存在相同峰的數量越多，并且含有相同峰質荷比值的數量也越多。

結論：

1)35株銅綠假單胞菌以β-內酰胺酶類抗生素耐藥率最高，其中碳青霉烯類耐藥率60%，頭孢類耐藥率約60%；氟喹諾酮類耐藥率最低。銅綠假單胞菌對碳青霉烯類耐藥可能與外膜通透性改變有關。

2)35株銅綠假單胞菌中有同源性菌株，說明有流行菌株存在。同一病區內和不同病區間均存在同源性菌株，不同部位來源的銅綠假單胞菌間有高度同源性。

3)相對于DiversiLab系統，VITEK　MS在細菌同源性分型方面只能起到初步分析的作用。