應用：全二維液相色譜串聯質譜分析不同產地甘草樣本

    二維液相色譜(2D-LC) 是將兩種分離機理不同而又相互獨立的液相分離模式串聯起來構成的分離系統。該研究中作者等人收集了來自不同產地的甘草樣本，建立了全二維（LCxLC）分析方法，采用二極管陣列檢測器和質譜檢測器，經過方法優化，采用HILIC色譜柱作為第一維色譜柱，反相液相色譜柱作為第二維色譜柱。這種組合展現出了強大的分離能力，共鑒別分析了89種甘草中的化合物（UV、分子量和特征二級質譜數據分析）。通過測定不同產地甘草樣本中的化合物，發現了19到50種差異化合物，成功的對不成產地的甘草樣本進行了鑒別。

        NPLCxRPLC、SECx RPLC 、IECxRPLC均會導致溶劑不兼容情況，采用HILICxRPLC二維方法對于分析酚酸類化合物（phenolic compounds）十分有效，采用二極管陣列檢測器和質譜檢測器檢測二維色譜峰的相對位置，可以很好地鑒定甘草中的酚酸類和皂苷類成分。

圖1 第一維液相色譜柱選擇（A:Silica column; B: Diol column; C:ZIC-HILIC column, 280nm）

        第一維色譜柱的選擇見圖1，作者等人試驗了三種不同類型的HILIC色譜柱（silica, diol和 ZIC-HILIC 色譜柱），最終選擇采用微內徑ZIC-HILIC色譜柱作為第一維色譜柱，選擇C18色譜柱作為第二維色譜柱。采用2位，10通系統實現全二維色譜切換，定量環體積為30μL，切換時間為1.3min . 第一維流速為15μL/min，第二維流速為3mL/min。

圖2 全二維化合物分布圖及第二維梯度洗脫條件優化

        較早出峰的為極性較小的酚類化合物（黃酮、黃酮烷類、異戊烯基黃酮、異黃酮等），后出峰的為極性較大的三萜皂苷類化合物，作者等人對第二維洗脫梯度進行了優化，最終選擇了分段梯度洗脫模式，使化合物在二維圖上的分布更加均勻，有效峰容量增加，結果見圖2.

圖3 不同產地甘草樣本的化合物全二維色譜分布圖

        通過該方法對產地來源于中國、伊朗、意大利、阿塞拜疆的甘草樣品進行分析，見圖3. 并通過二級質譜分析了各類化合物的裂解規律，通過分子量和特征二級質譜數據共鑒別分析了89種甘草根中的化合物，圖4為各類化合物質譜二級裂解總結。

圖4 甘草樣本中部分化合物的結構和二級質譜圖（A:liquiritigenin, B:licorice glycoside A, C:licorice glycoside B, D:liquiritin apioside）

        作者等人對于不同產地甘草樣本中差異化合物進行分析，不同產地樣本中的差異化合物見圖5. 總共發現了19到50種差異化合物，成功的對不同產地的甘草樣本進行了鑒別。

圖5 不同產地甘草樣本中差異化合物全二維色譜分布圖