誘導多能干細胞iPSC培養基質如何轉換注意事項

摘要 : 滋養層細胞在胚胎干細胞的培養中扮演了雙重角色，同時提供了生長底物和生長因子。后者我們能用外源的生長因子來替代。至于前者，一些研究人員也開始用基底膜基質來替代，如BD的Matrigel。當然，人類胚胎干細胞及誘導多能干細胞（iPSC）的最佳培養條件是成分完全明確，并且完全人源性的。 為此，StemCell Technologies公司就推出了StemAdhere Defined Matrix，該產品含有一種人源重組

滋養層細胞在胚胎干細胞的培養中扮演了雙重角色，同時提供了生長底物和生長因子。后者我們能用外源的生長因子來替代。至于前者，一些研究人員也開始用基底膜基質來替代，如BD的Matrigel。當然，人類胚胎干細胞及誘導多能干細胞(iPSC)的最佳培養條件是成分完全明確，并且完全人源性的。

為此，StemCell Technologies公司就推出了StemAdhere? Defined Matrix，該產品含有一種人源重組蛋白，可用于人類多能干細胞的長期培養。StemCell 公司推薦使用該基質膠作為Matrigel的替代品，雖然其價格會比Matrigel貴30%-40%，但它成分明確，并且可與TeSR?2培養基共同使用，帶來一個完全確定、無動物蛋白、不依賴滋養層的培養系統。

當然，從Matrigel轉換到StemAdhere，iPSC需要一個適應過程，StemCell公司也開發出一個優化步驟，便于培養的轉換。據專家介紹，iPSC最初會經歷一個“適應期”，正如之前從滋養層細胞到無滋養層條件的轉換。在剛剛轉換到StemAdhere 時，iPSC培養物的粘附和擴增速率都低于預期。在2-4代后，生長和鋪板效率通常會改善，并達到之前的水平。詳細步驟請點擊此處查看。

Stemcell的專家還給出了5條建議，讓您優化從Matrigel到StemAdhere的培養轉換。

1.在傳代StemAdhere上培養的iPSC細胞時，使用Gentle Cell Dissociation Buffer，而不是dispase解離酶。

2.使用非組織培養處理的培養板，因為StemAdhere蛋白不能很好地粘附在組織培養處理的塑料制品上。

3.在傳代前仔細檢查您的培養物，排除分化區域。

4.在最初的轉換步驟中，以1:1的比例分割細胞，以確保高水平的粘附。

5.在后續傳代時，分割比例可更高一些，以維持最佳的細胞密度。

專家還特別提醒，因基質組分的差異，iPSC在適應StemAdhere時，形態上會有輕微的改變。這是很正常的，StemAdhere上的克隆將繼續表達高水平的多能性標志物，維持正常的核型，并保留了在畸胎瘤實驗中產生三個胚層的能力。

Stemcell公司的產品包括：檢測造血干細胞功能的半固體培養基MethoCult?和MyeloCult?系列，培養和鑒定間充質干細胞的MesenCult?系列，培養和分析神經干細胞的NeuroCult?系列，培養胚胎干細胞和多能干細胞的Es-Cult?系列產品，可以分選各種細胞的免疫磁性分選系統EasySep?，全自動細胞分選儀RoboSep?，全自動克隆挑選系統EasyPick?，及與其配套使用的ClonaCell?-HY試劑等等。