正常小鼠腹股溝脂肪墊獲取脂肪源干細胞
實驗材料：
1.Hank&rsquo緩沖鹽溶液（H）；
2.ASC培養基：含10%胎牛血清的DMEM，添加1%的P/S；
3.膠原酶溶液：100ml Hank&rsquo緩沖鹽溶液中加入1g牛血清白蛋白和0.1gⅡ型膠原酶；
4.聚乙烯吡咯酮碘溶液；
5.陪替氏培養皿，9cm；離心管，50ml；組織培養瓶，25cm2；
6.剪刀（2把），鑷子（2把）；
7.A；
8.小鼠，4—6只；
9.麻醉劑：三溴乙醇；
實驗方法：
1.37℃水浴中預熱H和脂肪源干細胞培養基；
2.麻醉動物后處死；
3.轉移動物至層流凈化罩中；
4.70%酒精消毒腹部；
5.采用低位橫向切口打開腹腔；
6.用鑷子取出性腺/附睪和腹股溝處的脂肪墊；
7.將脂肪組織置于培養皿中，加入H；
8.待所有動物脂肪取出后，將脂肪轉移至新的培養皿中；
9.加入含有5%聚乙烯吡咯烷碘酮的H 2—3min；
10.漂洗組織并用H洗滌脂肪；
11.用無菌鑷子將脂肪轉移至50ml離心管中；
12.用無菌剪刀將脂肪切碎；
13.加入與組織體積相同的膠原酶溶液并混勻；
14.將離心管置于37℃水浴中60min，其間不時混勻一下；
15.離心，50—100g，5min；
16.取出離心管，用力搖晃（將基質細胞與原代脂肪細胞完全分離），再次離心5min；
17.小心吸去上層油脂，油脂層中含有原代脂肪細胞，注意不要破壞位于下方的基質—血管細胞層；
18.加入5—10ml A，重懸沉淀，再次離心5min；
19.洗滌三次，注意不要吸走基質—血管細胞層；
20.最后一次洗滌后，加入8ml ASC培養基重懸沉淀，轉移至T25培養瓶中，置于37℃，5%CO2溫箱中；
21.待細胞貼壁生長2—4天后換液；
22.換液時通過棄去培養基，從而去除未貼壁的細胞；
23.以后每周更換培養基2次。