三鹿事件：三聚氰胺檢測方法匯總

三鹿奶粉事件沸沸揚揚，各地致病患兒的致命成分——三聚氰胺檢測方法匯總

GC-MS法測定動物食品中的三聚氰胺

Spectra-Quad實現三聚氰胺含量在線檢測

超高效液相色譜_電噴霧串聯質譜法測定飼料中殘留的三聚氰胺

反相高效液相色譜法測定飼料中三聚氰胺的含量

高效液相色譜-二極管陣列法測定高蛋白食品中的三聚氰胺

高效液相色譜法(HPLC)測定飼料中三聚氰胺的含量

高效液相色譜-四極桿質譜聯用測定飼料中三聚氰胺含量

固相萃取與高效液相色譜聯用測定寵物食品中三聚氰胺

液相色譜串聯質譜法(LC-MSMS)分析寵物食品中三聚氰胺

液相色譜-串聯質譜法測定飼料中三聚氰胺殘留

GC-MS法測定動物食品中的三聚氰胺

2.1儀器與條件

Agilent1100高效液相色譜儀(美國，Agilent公司);二極管陣列檢測器(DAD)，檢測波長240nm，柱溫：40℃。

(1)AgelaVenusilTMASBC18(4.6×250mm);緩沖液：10mM檸檬酸,10mM庚烷磺酸鈉;流動相：緩沖溶液:乙腈=85:15;流速：1.0mL/min。

(2)AgelaVenusilTMASBC8(4.6×250mm);流動相：緩沖液：乙腈=85：15;緩沖液：10mM檸檬酸，10mM辛烷磺酸鈉，調pH為3.0;流速：1.0mL/min;

離子交換固相萃取柱AgelaClearnertTMPCX(北京艾杰爾科技有限公司)

2.2試劑與樣品

寵物飼料樣品(農業部飼料供應中心提供);甲醇、乙腈為北京艾杰爾科技有限公司提供;氨水、乙酸鉛、三氯乙酸、均購于北京化學試劑公司;三聚氰胺標準品、檸檬酸、辛烷磺酸鈉(Sigma公司);甲醇為色譜純，其他均為化學純。

3實驗方法

3.1樣品前處理方法

(1)標準樣品配制：

取50mg三聚氰胺標準品，以20%甲醇溶解定容至50mL得到1000ppm的標準溶液，使用時，以提取液(0.1%三氯乙酸)稀釋至所要的濃度。

(2)提取：

稱取飼料樣品5g，加入50ml0.1%三氯乙酸提取液，充分混勻，加入2mL2%乙酸鉛溶液，超聲20min。

然后取部分溶液轉移至10mL離心管中，8000rpm/min離心10min，取上清液3mL過混合型陽離子交換小柱(PCX)。

(3)凈化(PCX小柱，60mg/3mL)：

a)活化及平衡：3mL甲醇，3mL水

b)上樣：加入提取液3mL

c)淋洗：3mL水;3mL甲醇;棄去淋洗液并將小柱抽干。

d)洗脫：5mL5%氨化甲醇(v/v)洗脫。(5%氨化甲醇的配制：5mL氨水+95mL甲醇)。

e)濃縮：50℃，氮氣吹干，20%甲醇/水定容至2mL，HPLC分析或衍生后GC/MS分析。

3.2HPLC檢測方法

3.2.1三聚氰胺HPLC-UV檢測方法

三聚氰胺是強極性化合物，在傳統的反相C18柱上保留很差，需要用離子對試劑色譜方法才能有良好的保留與分離，按照美國食品藥品監督管理局(FDA)的三聚氰胺檢測方法和中國農業部公布的三聚氰胺檢測方法，采用艾杰爾(Agela)ASB系列親水色譜柱，可以得到良好的分離效果，分析色譜圖如下：

圖2VenusilASB色譜柱分離三聚氰胺的譜圖

(a)色譜柱：VenusilASBC84.6×250mm;標準：FDA方法;流動相：緩沖液：乙腈=85：15;緩沖液：10mM檸檬酸，10mM辛烷磺酸鈉，調pH為3.0;流速：1.0mL/min;柱溫：40oC;波長：240nm

(b)色譜柱：VenusilASB-C184.6×250mm;標準：中國農業部頒標準方法;緩沖液：10mM檸檬酸,10mM庚烷磺酸鈉;流動相：緩沖溶液:乙腈=85:15;流速：1.0mL/min;柱溫：40℃;波長：240nm

空白加水平(mg/L)回收率0.01116%0.1108%0.592%296%

3.2.2三聚氰胺LC-MS檢測方法

由于FDA公布的HPLC-UV方法中，流動相添加了離子對試劑，因此限制了液質聯用方法的使用;但不用離子對試劑色譜方法，三聚氰胺在傳統的C18柱上保留很差，不能得到較好的分離定量〔3〕。

基于此問題，艾杰爾科技公司自主開發了新的方法，采用艾杰爾(Agela)ASB系列親水色譜柱，不用離子對試劑也能得到有效的保留與分離。因此方法中流動相不含離子對試劑，可以用于質譜檢測。

與FDA2007年4月公布的《UpdatedFCCDevelopmentalMelamineQuantitation(HPLC-UV)》相比較，該方法大大降低了最低檢測限(MSD：0.5ppm;UV：2ppm)，提高了檢測靈敏度。

以該方法分別在ASB-C84.6×250mmASB-C184.6×250mm得到的譜圖如下：

圖3LC-MS方法檢測三聚氰胺的譜圖

緩沖液：10mM的NH4AC;流動相：Buffer:：ACN=95：5;流速：1.0mL/min;進樣量：樣品先用70%ACN溶解成約1mg/mL，用ACN稀釋成0.1mg/mL，進10uL;柱溫：40℃;波長：240nm

4結果與討論

4.1陽離子交換柱(PCX)

三聚氰胺呈弱堿性(弱陽離子化合物)，凈化過程一般應選擇陽離子交換柱。混合型的陽離子交換柱(PCX)通過將磺酸基團(-SO3H)鍵合在極性高聚物聚苯乙烯/二乙烯苯(PEP)吸附劑上，具有陽離子交換和反相吸附兩種機理，并具有以下優點：

a)可通過兩種不同溶液的洗滌(水/一定pH值的緩沖溶液和有機溶劑)，使樣品更干凈，提高檢測的靈敏度。

b)批次重復性好。

c)回收率高，重現性好，即使小柱跑干也可以得到較高回收率。

4.2LC-MS方法優點：

(1)檢測過程簡便：無須添加離子對試劑，三聚氰胺就可得到良好的保留與分離，避免了配制離子對流動相的復雜過程。

(2)提高了檢測的靈敏度：無離子對試劑，可以用于質譜檢測器，大大降低了最低檢測限(MSD：0.5ppm;UV：2ppm)。

(3)降低了檢測成本：不用離子對試劑，就不再需要買價格較貴的離子對試劑了，從而降低了檢測成本。

(4)延長了色譜柱的使用壽命：避免了使用離子對試劑減少色譜柱壽命的影響。

(5)該方法所使用的色譜柱具有通用性：無論是用FDA方法、中國農業部部頒標準方法和本公司開發的LC-MS方法，使用艾杰爾(Agela)ASB系列親水色譜柱均能得到一個很好的檢測結果，從而給客戶提供了多種選擇空間。

國家食品質量監督檢測中心有關人士說，在現有的國家標準奶粉檢測中，主要進行蛋白質、脂肪、細菌等檢測。三聚氰胺屬于化工原料，是不允許添加到食品中的，所以現有標準不會包含相應內容。也就是說，三聚氰胺不屬于常規檢測項目，正常情況下，很少有人會想到去檢測它。