再生障礙性貧血患者T細胞亞群及細胞因子的檢測

　摘要　為了探討再生障礙性貧血(再障)的免疫發病機制，闡明細胞免疫、細胞因子在再障患者中的變化。本文采用APAAP法和ELISA分別檢測再障患者及正常人外周血T細胞亞群、PBMC經PHA培養上清中IL-2、IL-3和IFNγ水平。結果表明，再障患者外周血CD3、CD4、CD4/CD8降低，CD8升高；IL-2、IFNγ水平升高，IL-3水平降低。相關分析發現CD8與IL-3呈負相關，而與IFNγ呈正相關。據此認為細胞免疫功能異常及細胞因子網絡失調在再障發病中起一定作用。 
　　關鍵詞　再生障礙性貧血　　細胞因子　　T細胞亞群

　　現知細胞免疫功能紊亂與造血功能衰竭密切相關［1］。T淋巴細胞及其產生的淋巴因子白介素-2(IL-2)、白介素-3(IL-3)和γ干擾素(IFNγ)在造血和免疫調節過程中起著重要的作用。本文測定再障患者T細胞亞群、PBMC經PHA培養上清中IL-2、IL-3和IFNγ的水平，以探討T細胞亞群及上述細胞因子與再障發病關系及臨床意義。

材　料　和　方　法

　　一、　研究對象　臨床確診的再障成年患者50例，病程1～26年。其中治療后癥狀未見明顯改善者30例，治療后已取得顯著療效并處于恢復期者20例。健康成人對照組20名。 
　　二、　方法 
　　1.按常規分離外周血單個核細胞(PBMC)并制成2×106/ml懸液，加終濃度為100 mg/L的PHA置37℃，5% CO2培養48 h、離心(2000 r/min)取上清液，置-20℃保存，用ELISA測IL-2、IL-3和IFNγ，試劑盒均為美國Biomedical公司產品。 
　　2. T細胞亞群測定　采用APAAP橋聯酶免疫檢測法，試劑盒購自華美公司。

結　　果

　　一、　細胞因子及T細胞亞群結果　從表1可見再障患者CD8、IL-2值和IFNγ值高于正常對照組，而IL-3、CD3、CD4、CD4/CD8低于正常對照組，均有顯著性差異。 
　　二、　再障患者細胞因子及T細胞亞群與病情關系　從表2可見治療恢復期者CD8、IL-2、IFNγ低于尚未見效者，而IL-3、CD3、CD4、CD4/CD8高于尚未見效者，均有顯著性差異。

表1　正常對照組與再障組  細胞因子及T細胞亞群比較(±s)細胞因子及T細胞亞群 正常對照組 
(n=20) 再障組 
(n=50) P值 
IL-2(ng/L) 50.66±20.42 109.82±48.47 ＜0.01 
IL-3(ng/L) 26.22±7.32 　11.92±6.84 ＜0.05 
IFNγ(μg/L) 　5.02±0.82 　10.19±5.42 ＜0.05 
CD3(%) 68.28±5.07 　55.61±11.48 ＜0.05 
CD4(%) 43.77±6.12 　35.29±9.60 ＜0.05 
CD8(%) 24.65±5.32 　28.22±3.49 ＜0.05 
CD4/CD8 　1.81±0.25 　1.38±0.20 ＜0.01

表2　恢復期與尚未見效組 三種細胞因子及T細胞亞群比較(±s) 細胞因子及T細胞亞群 治療恢復組 
(n=20) 尚未見效組 
(n=30) P值 
IL-2(ng/L) 72.66±24.10 99.19±58.42 ＜0.05 
IL-3(ng/L) 24.62±8.92 15.29±9.41 ＜0.05 
IFNγ(μg/L) 　6.79±1.60 　9.96±4.99 ＜0.05 
CD3(%) 59.95±5.96 55.90±5.13 ＜0.05 
CD4(%) 40.15±1.86 36.17±2.97 ＜0.05 
CD8(%) 24.75±3.15 28.12±3.89 ＜0.05 
CD4/CD8 　1.69±0.24 　1.40±0.18 ＜0.01

　　三、　再障患者CD8與各因子間相關性分析　50例再障患者相關分析，發現CD8與IL-3呈負相關，r值-0.40；與IFNγ呈正相關，r值0.42；與IL-2無相關，r值0.18。

討　　論

　　再障患者表現為外周血T細胞亞群失調，其異常激活的CD8細胞能抑制造血，其作用與其直接損害造血干細胞及CD8介導的造血因子失調有關［1］。我們實驗結果表明CD3、CD4、CD4/CD8降低，CD8升高，治療恢復期CD3、CD4、CD4/CD8上升、CD8下降，支持再障患者T細胞亞群異常及激活的CD8細胞起關鍵作用的觀點。 
　　本文還顯示，再障患者組IL-2含量明顯高于正常對照組、與文獻報道基本一致［2］。治療恢復期患者組的IL-2明顯低于尚未見效的病人組，提示再障患者IL-2異常升高與再障細胞免疫功能紊亂有關，治療恢復期者IL-2降低接近正常對照組是細胞免疫紊亂得到調節的結果，與國內外報道一致［3、4］。 
　　據實驗推測，再障患者IL-3等造血細胞生長因子活性低下［5］。本文實驗結果表明再障患者IL-3含量明顯低于正常對照組；而再障恢復期患者明顯高于尚未見效者。故支持上述推測，說明IL-3能促進骨髓造血功能的恢復。 
　　本文50例再障患者IFNγ明顯高于正常對照組，而再障恢復期患者明顯低于尚未見效的病人，從而支持了IFNγ在人體內對造血細胞的抑制作用［6］，說明IFNγ與再障發病的有關。 
　　分析再障患者受檢指標間的相關性發現CD8與IL-3呈負相關，與IFNγ呈正相關，認為CD8異常激活而升高，產生IFNγ量增多，共同抑制造血，而IL-3降低，使多種造血組細胞的增殖和分化能力下降，導致造血功能衰竭。揭示細胞因子的變化與再障的細胞免疫異常及造血抑制相關聯，并反映細胞因子網絡失調在再障發病中起一定作用。 
　　以本文實驗數據初步分析，再障患者造血功能的減退與IL-2、IFNγ、CD8升高和IL-3、CD3、CD4、CD4/CD8降低有關，經治療有效后IL-2、IFNγ、CD8降低和IL-3、CD3、CD4、CD4/CD8升高，支持細胞免疫功能障礙及細胞因子分泌紊亂參與再障發病。因此檢測T細胞亞群及IL-2、IL-3和IFNγ對骨髓造血和再障的病情、判斷預后及療效觀察有重要的參考價值。

參　考　文　獻

［1］　Mentzel U, voget H, Rossol R et al.Analysis of lymphocyte subsets in patient with AA before and during immuno suppressive therapy. Ann Haematol,1993;66(3)∶127 
［2］　連天順，趙志平．再生障礙性貧血白細胞介素-2及其受體細胞的研究．中華血液學雜志，1990；11(5)∶235

［3］　陳克奇，邵宗鴻，周宇等．再生障礙性貧血患者血中IL-1a，IL-2和SIL-2R水平變化．中國實驗臨床免疫雜志，1999；11(5)∶260 
［4］　Nissenc,Mosery,Weisj,et al. The release of interleukin-2 and colony stimulating activity (CSA) in aplastic anemia patient opposite behaviour with improvement of bone marrow function, Bult,1986;52∶221 
［5］　梁旭陽，李樹濃，陳俊．免疫介導小鼠再生障礙性貧血與白細胞介素-3及其受體關系．中華血液學雜志，1993；14(4)∶174 
［6］　曹洛環，趙志平，白任查．再生障礙性貧血γ干擾素水平測定及其臨床意義探討．中華血液學雜志，1989；10(2)∶71

薛志忠（上海中醫藥大學附屬岳陽中西醫結合醫院　200437） 
夏豐（上海中醫藥大學附屬岳陽中西醫結合醫院　200437） 
何瑋（上海中醫藥大學附屬岳陽中西醫結合醫院　200437）