原位雜交組織化學雜交體檢測

   雜交體檢測又稱雜交體顯示，是指通過一定方法使雜交反應形成的雜交體（雜交信號）成為在顯微鏡下可識別的產物。對原位雜交反應信號進行顯示的方法因探針標記物不同而異。

    （一）放射性核素標記探針的檢測

    *個原位雜交實驗（1969年）以’H作為核酸探針的標記物，雜交信號用放射自顯影術檢測。隨著原位雜交技術的推廣和應用，32P、125I及35S等放射性核素均可用來標記探針，放射自顯影技術也一直是用于雜交信號檢測的手段之一。

    放射自顯影是利用感光乳膠記錄被研究材料中放射性物質分布和定位的方法。在原位雜交中，放射自顯影術的基本過程包括：組織切片中結合在探針上的放射性核素以某種射線使感光乳膠曝光，形成潛影，再經顯影、定影和水洗等程序獲得影像。所形成的影像是與放射性標記物分布和活度一致的正像，即有曝光的部位形成黑影，放射性越強，曝光形成的黑影越深。

放射自顯影檢測技術具有敏感性高和易于定量分析等優點。但是。由于放射性核素對人體的輻射和半衰期短，使應用受到限制。

放射性同位素標記探針的原位雜交

    （二）非放射性標記探針的檢測

    根據標記物的不同，非放射性標記探針原位雜交信號的顯示方法也不同，如果用熒光素標記探針，雜交信號可直接在熒光顯微鏡下觀察，如果用辣根過氧化物酶或堿性磷酸酶標記探針，原位雜交信號可用相應底物的酶促反應來顯示。目前．常用非放射性標記物多為半抗原，以半抗原標記探針的原位雜交信號可通過免疫酶組織化學或親和組織化學技術顯示。如用生物素標記探針進行原位雜交，帶有標記探針的雜交體可以根據親和素—生物素親和組織化學原理，或生物素—抗生物素抗體的免疫細胞化學原理進行檢測。以地高辛標記探針在進行原位雜交反應后，可根據免疫組織化學原理，用結合有酶（如HRP或AKP）或熒光素的抗地高辛抗體與標記在探針上的地高辛進行免疫反應，再用相應底物顯示酶促反應或在熒光顯微鏡下觀察熒光間接顯示雜交體的存在。