葉綠體的分離與熒光觀察

實驗概要

本實驗介紹了葉綠體分離的基本原理及操作步驟。有助于了解葉綠體分離的一般原理和方法，并熟悉應用熒光顯微鏡方法觀察葉綠體熒光現象。

實驗原理

葉綠體是植物細胞中較大的一種細胞器，能發生特有的能量轉換。利用低速離心機可以分離葉綠體，其分離在等滲溶液（0.35mol/L氯化鈉或0.4mol/L蔗糖溶液）中進行，目的是為了防止滲透壓的改變引起葉綠體的損傷。將勻漿液在1000r/min離心，去除其中的組織殘渣和一些未被破碎的完整細胞，然后，3000r/  min離心，可獲得沉淀的葉綠體（混有部分細胞核）。在室溫下進行分離要迅速。

主要試劑

1. 蒸餾水

2. 0.35mol/L氯化鈉溶液

3. 0.01%吖啶橙

主要設備

1. 普通離心機

2. 研缽

3. 天平

4. 熒光顯微鏡

5. 載玻片

6. 蓋玻片

7. 鑷子

8. 恒溫箱

9. 培養皿

10. 濾紙

11. 試管及試管架

12. 移液管

13. 滴管

14. 燒杯

15. 離心管

實驗材料

菠菜葉片

實驗步驟

1. 選取新鮮的菠菜嫩葉，洗擦干后去除葉梗及粗脈，稱3g于0.35mol/L氯化鈉溶液15ml中置組織搗碎機或研缽中。

2. 利用組織搗碎機低速（5000r/min）勻漿，3-5min，或研磨成勻漿。

3. 用6層紗布過濾，濾液盛于燒杯中。

4. 取濾液4mL在1000r/min下離心2min，棄去沉淀。

5. 將上清液在3000r/min下離心5min，棄去上清液，沉淀即為葉綠體（混有部分細胞核）。

6. 沉淀用0.35mol/L氯化鈉溶液懸浮。

7. 取葉綠體懸液1滴置于載玻片上，加蓋玻片后用普通光學顯微鏡觀察。使用熒光顯微鏡觀察時，將葉綠體懸液滴在無熒光的載玻片上，再滴加1滴0.01%吖啶橙熒光染料，蓋上無熒光的蓋玻片后即可觀察。

8. 觀察葉綠體的形態結構、葉綠體發射熒光的現象。