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  • 發布時間:2018-03-27 13:56 原文鏈接: 掃描電鏡——細胞內部結構冷凍割斷法

    該方法簡便,結構清晰,已得到廣泛應用。其操作方法如下:
    1) 取材和固定:為了使細胞結構清晰,不被過多的血細胞污染,可在取材前用灌注法沖洗。即先將動物麻醉,經腹主動脈注入生理鹽水或低分子量的右,切開下腔靜脈放血,至無血色為止。然后迅速取材,將樣品修成1mm×1mm×5mm大小,投入1%鋨酸溶液中固定1小時,用1/15M磷酸緩沖液(pH7.4)清洗兩次,每次10分鐘。


    2) 二甲基亞砜浸泡:將樣品依次放入25%、50%二甲基亞砜溶液中,各浸泡30分鐘。


    3) 割斷:用TF—1型冷凍割斷裝置進行割斷。然后將割斷后的樣品放到50%二甲基亞砜中,等融化后再用1/15M磷酸緩沖液浸洗,每次10分鐘,換液5次。


    4) 軟化及后固定:將樣品放入0.1%鋨酸中軟化,溫度20
    ,時間48~72小時。然后用1%鋨酸固定1小時,雙蒸水浸洗1小時,換液幾次,需徹底清洗干凈。


    5) 導電染色:將樣品放入2%丹寧酸中2小時(或過夜),以雙蒸水清洗1小時,換液幾次。雙蒸水清洗1小時。


    6) 脫水、干燥及鍍膜:按常規方法進行。


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