新冠病毒的中和抗體ELISA試劑盒的使用方法

新冠病毒(COVID-19)有四種主要的結構蛋白：刺突蛋白（Spike protein，S蛋白），核衣殼蛋白（Nucleocapsid，N蛋白），膜蛋白（Membrane protein，M蛋白），包膜蛋白（Envelope protein，E蛋白）。刺突蛋白S蛋白有兩個亞基：S1和S2，其中受體結合位點（RBD）位于S1亞基上。COVID-19通過RBD與ACE2的結合介導進入細胞內部，因此阻斷病毒RBD和人ACE-2的特異性結合是潛在重要的治療方向之一 !說到這里就又不得不提到中和抗體了。

新冠病毒中和抗體可以特異性識別并且結合新冠病毒的RBD位點，搶先阻止病毒與人ACE-2結合，直接阻斷病毒的進一步感染。

Abnova全新推出的COVID-19中和抗體ELISA檢測試劑盒利用競爭法ELISA原理，當樣本中存在中和抗體時與刺突RBD蛋白結合，從而阻止了RBD與預包被板底的ACE2蛋白的結合，用于新冠病毒中和抗體的定量檢測。

實驗步驟：

1.將100ul2 ug/ml ACE2加入至每孔，4℃孵育過夜；

2.第二天，50 ul稀釋好的樣本+50ul 刺突RBD蛋白混合后，室溫孵育2h；

3.包被后，移除孔中的ACE2蛋白，加入稀釋好的封閉液，室溫封閉1h；

4.移除孔中的封閉液，用200ul wash buffer洗滌一次；

5.將孵育好的樣本+刺突RBD蛋白混合液100ul加入孔中，37℃孵育2h；

6.移除孔中的樣本-刺突RBD蛋白混合液，用200ul wash buffer洗滌，洗4次；

7.每孔中加入100ul稀釋好的HRP標記的抗兔Fc標簽二抗，37℃孵育1h（由于刺突RBD蛋白是帶有兔Fc標簽的，所以可以備該二抗特異性識別并結合）；

8.移除孔中的二抗，用200ul wash buffer洗滌，洗4次；

9.向每孔加入100ul TMB顯色液，輕輕混合，室溫孵育5min，每孔加入100ul終止液，輕輕混合，在450 nm波長下檢測吸光度。

標準曲線僅用于說明目的，不應用于計算未知數。每次檢測時均應做標準曲線。

（競爭法ELISA，微孔板中顏色的深淺與待測物的濃度呈負相關）

實驗結果展示：

用COVID-19中和抗體ELISA檢測試劑盒（Cat＃KA6111）進行對新冠病毒單克隆抗體（7F5、4E10和7F7）的中和測定

用COVID-19中和抗體ELISA檢測試劑盒（Cat＃KA6111）對DNAx免疫的新冠病毒多克隆抗體進行中和測定。

用COVID-19中和抗體ELISA檢測試劑盒（Cat＃KA6111）對SAM免疫的多克隆抗體進行中和測定。