染色體的標本制作及其組型實驗3

4.2 染色體的組型實驗
4.2.1. 選擇染色體清晰的照相底片，用放大機制作出放大10倍的清晰照片。
4.2.2 將染色體逐一剪下，并對每個中期染色體逐一進行測量，包括每條染色體的長度和每個臂的長度。
4.2.3. 根據測量數據，計算出每對染色體平均的相對長度、臂指數與著絲粒指數。
4.2.4 把相對長度與臂指數相近者配成一對。
4.2.5. 參照相對長度、臂指數與著絲粒指數的數值，并根據標準順序，編排出染色體組型圖。
4.2.6. 用膠水或漿糊將每條染色體依照標準順序粘貼在實驗報告紙上。
5.實 驗 結 果
在顯微鏡下，染色體被染成紫紅色，胞漿完全不著色。對于分散好的染色體, 其間相互散開, 短臂收縮適中, 二條姐妹染色單體大致平行分離, 著絲粒清晰可見。小鼠的染色體數為40條，多為端部和亞端部染色體，只有2對亞中部著絲粒染色體。
人類染色體為46條，可分為A、B、C、D、E、F、G七個群，其各自的基本特征見表2。
表2 人類體細胞染色體的分類標準及其主要特征
類別 包括染色體的序號 主 要 特 征
A群 第1~3對 體積大，中部著絲粒。第2對著絲粒略偏離中央
B群 第4~5對 體積大，中部著絲粒。彼此間不易區分
C群 第6~12對，X 中等大小, 亞中部著絲粒。第6對的著絲粒靠近中央, X染色體大小介于第6與7對之間, 第9對的長臂上有一次縊痕, 第11對的短臂較長, 第12對的短臂較短, 彼此間不易區分
D群 第13~15對 中等大小，近端部著絲粒，有隨體。彼此間不易區分
E群 第16~18對 中等大小。第16對為中央著絲粒，長臂上有一次縊痕；第17、18對為亞中央著絲粒，后者的短臂較短
F群 第19~20對 體積小，中部著絲粒。彼此間不易區分
G群 第21~22對，Y 第21、22對體積小, 近端著絲粒, 有隨體, 長臂常呈分叉狀；Y染色體較前者略大, 近端著絲粒, 無隨體, 長臂常彼此平行
6.實驗報告
(1). 通過對自己制做的小鼠染色體標本觀察，總結小鼠染色體的形態特征。
(2). 對于分散好的染色體，進行染色體計數。
(3). 對于呈非整倍性的染色體標本，分析其形成原因。
(4). 認真做好小鼠的染色體組型圖。
7.思考題
（1）. 請你分析一下在本實驗中造成染色體標本制做不佳的原因有哪些？
答：1) 秋水仙素用量太多或處理時間過長，會導致染色體的過分凝縮或著絲點裂解，最終會引起染色體形態不正常，甚至被破壞或溶解。
2) 低滲處理不好。低滲液的量、處理時間均與細胞的數量有關。低滲過度，細胞會破裂；低滲不足則染色體在一起，分散不開。

3) 離心速度或離心時間的影響。離心速度過大或離心時間過長，則會引起細胞破裂；反之，離心速度過小或離心時間過短，則細胞沉降不下來，則會引起大量細胞的丟失。
4) 固定液要隨用隨配，固定徹底后再打散細胞團塊，否則細胞容易破碎，染色體分散亦受到影響。
5) 載玻片有油脂或冷卻不夠，則會影響染色體的附著和鋪展。
6) 用吸管吹散細胞時用力必須盡量輕柔，用力過大則會造成細胞破裂，而染色體也會彌散在溶液中，在隨后的離心中將會丟失。
7) 滴片時的高度很重要，高度過低細胞不會破裂；過高則染色體過于分散甚至丟失，無法辨別出染色體的準確數量。
（2）. 本實驗中，對由小鼠精巢而來的染色體標本進行鏡檢時, 發現染色體數有的為40條，而有的則為20條，為什么？擁有20條染色體的單倍體細胞會是什么細胞？

答：有40條染色體的可能是小鼠的體細胞、精原細胞、精母細胞。有20條染色體的可能是已完成第一次減數分裂的精細胞或精子。之所以同時出現40條和20條染色體，是因為精巢里存在大量正在進行有絲分裂和減數分裂的細胞，用秋水仙素處理后，所有細胞均停止分裂。
（3）. 從一般意義上講，染色體標本制做的四大要點是什么？
答：A、植物血球凝集素（PHA）處理獲得活躍分裂的細胞；
B、秋水仙素處理可使細胞分裂停止在中期；
C、低滲處理可使染色體分散；
D、空氣干燥法可使染色體平鋪在載玻片上。