毛細管電泳分離蛋白質多肽類物質一般用什么緩沖溶液

常用于毛細管電泳的緩沖溶液有：
硼砂、磷酸鹽、檸檬酸鹽、琥珀酸鹽和醋酸

緩沖體系的pH值要求與樣品的性質有關
通常酸性組分的分離選擇在堿性條件下進行,堿性組分則選擇酸性介質分離
蛋白質、多肽、氨基酸等兩性物質,可選酸性(pH2)也可選堿性(H>9)分離介質。

在毛細管電泳分離中
緩沖液是背景電解質
分離是基于樣品中各個組分間質荷比的差異。
有時需在緩沖液中加入定的添加劑,用以提高分離選擇性,改變電滲流的大小、方向或抑制毛細管壁的吸附等。
影響分離的操作條件為
◆分離電壓
◆背景電解質種類、濃度和pH
◆添加劑種類和濃度
1.分離電壓
分離效率與電壓間存在極大值。極大電壓通常也是最佳工作電壓。
在實際分離中,如果所用的毛細管很細或緩沖液的電導很低,極大電壓可能會超出儀器范圍,此時沒有最佳電壓,可選擇儀器允許的最大輸出電壓。
?當毛細管較粗或緩沖液電導較高時,極大電壓可能很小,若此時分離度很高,也可選擇大于極大值的電壓進行分離
2.分離溫度
毛細管的溫度不僅影響分離的重視性,而且影響分離效率。
溫度選擇應考慮熱效應、分析重現性、分離效率和分離介質對溫度的限制等因素。
?溫度的確定也應通過實驗,多數情況下,在20~30℃之間進行電泳,能獲得良好的分離效果。可根據初步分離結果調整溫度
?蛋白質分離需要低于室溫的分離條件。演
3.背景電解質
對背景電解質的要求:
①在所選擇的pH范圍內有足夠大的緩沖容量。
②在檢測波長處的吸收低。
③自身的淌度低,即分子大而荷電小,以減少電流的產生
④應使被測組分帶合適的電荷量,以實現有效進樣和有合適的電泳淌度
⑤盡可能采用酸性緩沖溶液,在低pH下,吸附和電滲流值都很小。
⑥與毛細管種類匹配,涂層毛細管只能在一定pH范圍內使用