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  • 發布時間:2019-04-06 20:04 原文鏈接: 淋巴細胞活化過程中肌醇磷脂周轉的分析

    實驗步驟

    基 本 方 案 1 通 過 道 威 克 斯(DOWEX) 離 子 交 換 層 析 分 析 [3H] 肌醇磷酸

    材料




    備 選 方 案 通 過 HPLC 方 法 分 析 [3H] 肌醇磷酸

    附加材料

    [3 H ] InsP 樣 本(見基本方案,步 驟 6) 和標準品
    除 氣 的 H PLC 級水
    2mol/L 的甲酸銨,以磷酸調至 pH3.7

    基 本 方 案 2 通過薄層層析方法分析肌醇磷脂

    材 料

    1 % (m/V ) 草酸鉀/2m m ol/LED TA

    溶劑: 60 : 20 : 23 : 18 : 12 (V7 V /V7 V 7 V ) 氯仿/甲醇/丙酮/乙酸/水 ,或 45 :35 : 10 氯仿/甲醇/4mol/L NH4OH

    細 胞(如腫瘤細胞系、雜交瘤、克隆、凝集素刺激的細胞)

    無 磷 酸 鹽 的 培 養 基(如 GIBCO/BRL) 含 有 1 0 % (V /V ) 熱 滅 活 的 胎 牛 血 清(FCS) , 用 HBSS 或 TBS (附錄 1 ) 透析以去除磷酸鹽

    展開


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