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  • 發布時間:2019-11-12 08:08 原文鏈接: 細胞浸潤生長性檢測實驗

               

    實驗方法原理

    浸潤性生長是細胞浸入或穿透其它組織增殖生長能力,浸潤生長性檢測是檢測癌性細胞的一項有意義的指標。檢測方法需用其它正常組織和癌細胞共同培養,觀察癌細胞向正常組織浸潤生長的情況。

    實驗材料

    雞胚

    試劑、試劑盒

    Bacto瓊脂 Eagle 緩沖液 小牛血清 福爾馬林 Hanks液 碘酒

    儀器、耗材

    玻璃圈 CO2溫箱 培養皿 平皿蓋 手術剪 手術鉗 離心機 注射器 燒杯

    實驗步驟

    常用雞胚皮膚或心肌組織塊,作為被浸潤生長的對象;今以雞胚皮膚為例,培養過程如下


    1.  程序


    (1)雞胚浸出液制備
     

    (2)瓊脂層制備
     

    1 %Bacto瓊脂(用不含NaHCO3的Eagle緩沖液配)10 分
     

    小牛血清 4 分
     

    雞胚浸出液 4 分


    (3)雞胚皮培養

    無菌從10 天胚齡雞胚背部取皮,切成6~8mm3小塊;每皿中置2~3 塊,貼在瓊脂層表面;


    (4)取內徑6 mm,厚2 mm的無菌小磁杯或玻璃圈(硅橡膠圈亦可),套在雞皮小塊上;


    (5)共培養

    向每個小磁圈中加入25~30 ul 細胞懸液(含104個細胞的2 倍培養液),蓋上平皿蓋,置37 ℃CO2溫箱中培養;


    (6)補液

    次日再向每個環中補加2 倍培養液2.5 ul;


    (7)切片觀察

    第4 天挖取出雞皮塊,10%福爾馬林固定,常規包埋、切片、染色、光學顯微鏡下觀察細胞對雞胚皮膚浸潤的情況。


    2.  結果

    如癌性細胞已浸入雞胚皮膚內,說明該細胞具有浸潤生長能力。

                展開           
    注意事項

    實驗過程應避免細菌感染,如癌性細胞已浸入雞胚皮膚內,說明該細胞具有浸潤生長能力。

    其他

    雞胚浸出液內含有生長因子、大分子核蛋白和小分子氨基酸等,有刺激細胞生長作用,為早年培養使用的培養用液,現已被合成培養液所代替,但在某些研究中仍有一定應用價值。

    來源《組織培養和分子細胞學技術》


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