熒光原位雜交體植入的應用實驗
PBl、PB2 標本的制備
1.在 50 mL 培養瓶準備新鮮固定液（甲醇：冰乙酸=3:1)，在冰柜中保存備用。
2.將毛細吸管在小型噴燈的火焰上拉出內徑約 50pm 的尖，內徑太大可能會丟失極體。
3.加幾滴固定液再處理預先處理過的玻片以清除可能存在的油脂或灰塵，用無塵紙吸干。
4.用巴斯德吸管吸少許 HPLC 純水加到可懸掛液滴的載玻片上。
5.從卵母細胞或受精卵成功取出極體后，可以用相差顯微鏡（10X、20X 物鏡）來觀察極體，極體存在于顯微操作儀上的平皿里的 20|uL 培養液滴里（液滴上面用礦物油覆蓋)[6]。
6.極體定位好后，用拉好的毛細吸管吸取少量水，以確定液體進出吸管的通暢。
7.在吸入少量水后，將極體輕輕吸入毛細吸管移向有水的可懸掛液滴載玻片上，從毛細吸管中輕輕吹出釋放極體，直到在玻片中心的圓圈中看到極體。勿讓極體固定和貼到可懸掛液滴載玻片的玻璃表面。
8.在水中漂洗片刻后，用毛細吸管重新吸入極體。極體周圍的油通常可以被水洗掉。將極體移向一張干凈的載玻片，輕輕吹出含極體的水滴將極體釋放。
9.當水分部分蒸發后，極體開始漲大，變扁平貼到玻片表面。在水分完全蒸發完之前用同一毛細吸管滴一滴固定液在極體上，使染色質分散開。
10.在固定液完全干掉前，再滴一滴固定液固定，必要時可重復幾次，直到細胞質完全溶解，仔細注意觀察此過程，應盡量將細胞質去除干凈。
11.用金剛石筆在染色質周圍畫圈定位，注意不能太重，以免玻璃碎屑的影響，再用力在圓圈周圍的玻片背面畫另一圓圈，以便輕易找到圓圈和分析時定位染色質的位置。
12.將玻片做好標記，包括患者姓名、卵母細胞編號以及合適的信息，如染色質塊數目。
13.再加數滴固定液到玻片上，用洗耳球吹干。
14.玻片可在室溫放置后或立即進行雜交，如果立即雜交，則推薦進行預處理。可在移植胚胎比較合理的時間范圍內得到很好的結果。
15.用不褪色標記筆在玻片的背面畫出極體染色體質所在，以便確定加探針的位置。
熒光原位雜交體植入的應用實驗，卵裂球標本的準備
1.在 50 mL 培養瓶準備新鮮固定液（甲醇：冰乙酸=3:1)，在冰柜中保存備用。
2.在一 35 mmX10mm 的有蓋培養皿底部刻一圓圈便于在此區域找卵裂球，在皿內加 3 mL 低滲液。
3.將 25~50uL 毛細吸管在小型噴燈的火焰上拉出內徑約 70um 的尖毛細吸管。
4.在毛細吸管吸入少量的低滲液。
5.在解剖顯微鏡下定位在培養液微滴內的卵裂球，再次確認制成的毛細吸管的內徑比卵裂球大，可以用來吸取卵裂球；然后用它輕輕地吸取卵裂球，將卵裂球移到低滲液皿內。
6.低滲 3~5 min 后，將卵裂球吸到管內移到有少許低滲液的玻片上。
7.在倒置顯微鏡下持續觀察卵裂球直到幾乎全干。在低滲液全干形成結晶之前在卵裂球上滴上一滴固定液。持續觀察細胞，在全干前滴一滴新固定液。如此重復幾次，直到細胞質裂解，留下細胞核。細胞質去除是否完全直接影響雜交 (見注釋 1)。
8.用金剛石筆標記卵裂球的位置以便于雜交后的定位。
9.在玻片的磨砂端注明合適的信息，再滴數滴固定液，用洗耳球吹干。
10.玻片可以進行預處理。在加探針前，用不褪色標記筆在玻片的背面標記卵裂球核的確切位置，以確定加探針的區域。
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