醬油中山梨酸、苯甲酸的測定

   一、目的與要求：

　　1、掌握醬油、水果汁、果醬中山梨酸、苯甲酸的測定原理及方法。

　　二、原理：

　　樣品酸化后，用乙醚提取山梨酸，苯甲酸。將樣品提取液濃縮，點于漿酰胺薄層板上，展開,顯色后，根據薄層板上山梨酸，苯甲酸的比移值與標準比較定性，并可進行概略定量。

　　三、試劑與儀器：

　　1、異丙醇

　　2、正丁醇

　　3、石油醚沸程：30-60℃。

　　4、乙醚：不含過氧化物

　　5、氨水

　　6、6N鹽酸：取100毫升鹽酸

　　7、無水乙醇。

　　8、聚酰胺粉：200目。

　　9、山梨酸標準溶液：精密稱取0.2000克山梨酸，用少量乙醇溶解后移入100毫升容量瓶中，并稀釋至刻度，此溶液每毫升相當于200毫克山梨酸。

　　10、苯甲酸標準溶液：精密稱取0.2000克苯甲酸，用少量乙醇溶解后移入100毫升容量瓶中，并稀釋至刻度，此溶液每毫升相當于2毫克苯甲酸。

　　11、展開劑

　　(1)正丁醇-氨K--無水乙醇(7：1：2)

　　(2)異丙醇-氨水-無水乙醇(7：1：2)

　　12、顯色劑：O.04%溴甲酚紫的50%乙醇溶液，用0.1N氫氧化鈉溶液

　　調至PH=8。

　　13、4%氯化鈉酸性溶液：于4%的氯化鈉溶液中加少量6N鹽酸酸化。

　　14、吹風機。

　　15、層析缸。

　　16、玻璃板：10 X 18cm

　　17、微量注射器：10微升，100微升。

　　18、噴霧器。

　　四、操作方法

　　1、樣品提取

　　稱取2.5克事先混合均勻的樣品，置于25毫升帶塞量筒中，加0.5毫升6N鹽酸酸化，用15、10毫升乙醚提取兩次，每次振搖1分鐘，將上層醚提取液吸人另一個25毫升帶塞量筒中，合并乙醚提取液。用3毫升4%氯化鈉酸性溶液洗滌兩次，靜止15分鐘，用滴管將乙醚層通過無水硫酸鈉濾人25毫升容量瓶中。加乙醚至刻度混勻，吸取l0.0毫升乙醚提取液分兩次置于10毫升帶塞離心管中，在約40 (2的水浴上揮發干，加入0.10毫升乙醇溶解殘渣，備用。

　　2、測定

　　(1)聚酰胺粉板的制備：稱取1.6克聚酰胺粉，加0.4克可溶性淀粉加約重5毫升，研磨3-5分鐘，立即倒入涂布器內制成10 X 8cm、厚度0.3mm的薄層板兩塊，于室溫干燥后保存，于80℃干燥1小時，取出，置于干燥器中保存。

　　(2)點樣：在薄層板下端2cm的基線上，用微量注射器點1微升，2微升樣品液，同時各點1微升、2微升山梨酸、苯甲酸標準溶液。

　　(3)展開與顯色：將點樣后的薄層板放人預先盛有展開劑[(1)或(2)]的展開槽內，展開槽周圍貼有濾紙，待溶劑前沿上展至lOcm，取出揮干，噴顯色劑、斑點成黃色，背景為藍色。樣品中所含有山梨酸、苯甲酸的量與標準斑點比較定量(山梨酸、苯甲酸的比移值依次為0.82，0.73)。

　　A×1000

　　計算： X=( A×1000)/(m×10/25×V2/V1×1000)

　　X：樣品中山梨酸(苯甲酸)的含量，g/kg;

　　A：測定用樣品液中山梨酸(苯甲酸)的含量，mg;

　　M：樣品質量，g;

　　Vl：加入乙醇的體積，ml.，

　　V2：測定時點樣的體積，ml; ·

　　10：測定時吸取乙醚提取液的體積，ml;

　　25：樣品乙醚提取液總體積，m1。

　　注：此方法還可以同時測定果醬、果汁中的糖精。