間充質干細胞（MSC）如何培養與鑒定

相比于胚胎干細胞或神經干細胞，MSC具有易獲取、易體外培養、傳代穩定性、低免疫原性等優勢，在體外經過多次傳代后仍具有多向分化和自我復制的潛能，且MSCs多來自于成年的組織，研究過程的道德和倫理學問題較小。

MSC的大小與形狀具有異質性，即不同種屬或不同組織的MSC具有不同的生長形態，例如三極形、長梭形、小圓形、短梭形和扁平形態。幾乎所有的MSC都是貼壁生長，具有較強的貼壁能力，而MSC的原代分離也正是利用了MSC強貼壁的特性。例如，骨髓MSC的分離方法為：將從組織中分離出來的單個核細胞懸浮培養于含有FBS的培養基中，1~2天后去除非貼壁細胞，保留貼壁細胞再培養2-3周即可獲得。此外也可采用免疫磁珠對MSC進行分選，但這種方法成本較高。

對于MSC的鑒定，常采用的方式包括形態學鑒定，表面標志物鑒定和多系分化潛能鑒定。MSC一般呈纖維細胞樣生長，細胞在支持物表面呈梭形或不規則三角形生長，細胞中央有卵圓形核，胞質向外伸出2-3厘米長短不同的突起。MSC的細胞表面標志物則常采用流式細胞儀進行鑒定，不同組織來源的MSCs可共享相同的細胞表面標記，如CD29和CD44。但目前我們對MSC表面分子標志物的研究還不完善，已發現的表面標志物也存在特異性不強的問題，為了讓我們更好地分離、培養和鑒定MSC，需進一步不斷發現新的特異性標志物。

                                         常見的方法 

茜素紅染色（成骨誘導）

茜素紅S(AlizarinRedS)鈣染色法是一種旨在通過鰲和技術，使鈣離子和茜素紅S產生復合物，來分析固定處理的細胞樣本中橘紅色鈣沉積現象的經典的技術方法。主要適用于動物原生代或培養細胞的鈣沉積和鈣化結節檢測。廣泛用于骨細胞或組織病理生理的研究。操作簡捷，性能穩定，顯色清晰。

Oil Red O（油紅O）染色（成脂誘導）

作為脂肪細胞的染色劑的原理是使用Oil Red O 的油溶性，對其它的細胞結構著色性差。成脂肪誘導的過程中，細胞在胞漿中不斷有油滴的累積，并不斷的增加變大，后整個細胞的胞漿中都是油滴。Oil Red O染色的方法是對油滴的染色的一種方法。