質粒DNA限制性酶切及瓊脂糖凝膠電泳分離鑒定2
EcoRI酶及其酶切緩沖液；HindⅢ酶及其酶切緩沖液；瓊脂糖(Agarose)。 二、 器材 電泳儀, 臺式高速離心機, 恒溫水浴鍋, 微量移液槍, 微波爐, 瓊脂糖凝膠成像系統。 操作方法 一、 DNA酶切反應 1. 用微量移液槍向滅菌的eppendorf管分別加入DNA 1μg和相應的限制性內切酶反應10×緩沖液2μL, 再加入去離子水使總體積為19μL, 將管內溶液混勻后加入1μL酶液,用手指輕彈管壁使溶液混勻, 也可用微量離心機甩一下, 使溶液集中在管底。 2. 混勻反應體系后, 將eppendorf管置于適當的支持物上（如插在泡沫塑料板上）, 37℃水浴保溫2-3小時, 使酶切反應完全。 3. 每管加入2μL 0.1mol/L EDTA(pH8.0), 混勻, 以停止反應, 置于冰箱中保存備用。 二、DNA分子量標準的制備 采用EcoRⅠ或HindⅢ酶解所得......閱讀全文
質粒DNA限制性酶切及瓊脂糖凝膠電泳分離鑒定2
EcoRI酶及其酶切緩沖液；HindⅢ酶及其酶切緩沖液；瓊脂糖(Agarose)。 二、 器材 電泳儀, 臺式高速離心機, 恒溫水浴鍋, 微量移液槍, 微波爐, 瓊脂糖凝膠成像系統。 操作方法 一、 DNA酶切反應 1. 用微量移液槍向滅菌的eppendorf管
質粒DNA限制性酶切及瓊脂糖凝膠電泳分離鑒定1
實驗原理一、DNA的限制性內切酶酶切分析限制性內切酶能特異地結合于一段被稱為限制性酶識別序列的DNA序列之內或其附近的特異位點上,并切割雙鏈DNA。它可分為三類:I類和III類酶在同一蛋白質分子中兼有切割和修飾(甲基化)作用且依賴于ATP的存在。III類酶結合于識別位點并隨機的切割識別位點不遠處的D
質粒DNA的酶切和瓊脂糖凝膠電泳鑒定
[實驗原理]限制性內切酶識別短的DNA序列并在識別序列內或旁側特異性切割雙鏈DNA。對環狀DNA有多少切口，就能產生多少個酶解片段，因此鑒定酶切后的片段在電泳凝膠中的區帶數，就可以推斷酶切口的數目，從片段的遷移率可以大致判斷酶切片段大小的差別。DNA分子在瓊脂糖凝膠中泳動時有電荷效應和分子篩效應。D
DNA限制性酶切及凝膠電泳，實驗原理及方法2
3、 DNA分子的構象當DNA分子處于不同構象時,它在電場中移動距離不僅和分子量有關,還和它本身構象有關。相同分子量的線狀、開環和超螺旋DNA在瓊脂糖凝膠中移動速度是不一樣的,超螺旋DNA移動最快,而線狀雙鏈DNA移動最慢。如在電泳鑒定質粒純度時發現凝膠上有數條DNA帶難以確定是質粒DNA不同構象引
質粒DNA的限制性內切酶（restriction－endonuclease,－RE）酶切及..
實驗原理： 限制性內切酶（restriction endonuclease, RE）能特異地結合于一段被稱為限制性酶識別序列的DNA序列之內或其附近的特異位點上，并切割雙鏈DNA。限制性內切酶可分為三類：I、Ⅱ和III類。I類和III類酶在同一蛋白質分子中兼有修飾（甲基
質粒DNA的限制性酶切及電泳分析
原理 限制性核酸內切酶能特異地識別和切割雙鏈DNA中的堿基順序，本實驗中所用的pBS-SK質粒分子總長約2.9kb，經酶HindⅢ切割后，閉合環狀質粒DNA即變成線性DNA分子。 不同大小、不同形狀和不同構象的DNA分子在瓊脂糖凝膠中有不同的電泳遷移率，因而可通過電泳使其分離。
質粒DNA的提取、酶切與鑒定
1. DNA 瓊脂糖凝膠電泳 ① 瓊脂糖凝膠的制備：稱取0.6g 瓊脂糖，置于三角瓶中，加入50 mL TBE 緩沖液，經沸水浴加熱全部融化后，取出搖勻，此為1.2%的瓊脂糖凝膠。 ② 膠板的制備：取橡皮膏（寬約1cm）將有機玻璃板的邊緣封好，水平放置，將樣品槽板垂直立在玻璃板表面。將冷卻至65℃左
質粒DNA限制性酶切圖譜分析
一、DNA的限制性酶切實驗原理核酸限制性內切酶 是一類能識別雙鏈ＤＮＡ中特定堿基順序的核酸水解酶，這些酶都是從原核生物中發現，它們的功能猶似高等功物的免疫系統， 用于抗擊外來ＤＮＡ的侵襲。限制性內切酶 以內切方式水解核酸鏈中的磷酸二酯鍵， 產生的ＤＮＡ片段５’端為Ｐ，３’端為ＯＨ。1. 限制性內切酶
DNA酶切及鑒定
實驗概要限制酶主要存在原核細胞中。多數來源于細菌，有的來源于藍藻和鏈霉菌，極少數來源于支原體等微生物中，存在原核細胞的限制酶能在特異的識別位點切斷外源DNA，如感染的噬菌體。而宿主細胞內的DNA則因它的一些特異識別位點常常由于其中一個堿基的甲基化被保護起來，從而使此位點不再成為限制酶的底物。限制性內
質粒DNA瓊脂糖凝膠電泳鑒定實驗
實驗材料瓊脂糖試劑、試劑盒溴化乙錠儀器、耗材瓊脂糖凝膠電泳裝置紫外燈實驗步驟1. ?瓊脂糖凝膠電泳裝置?由于瓊脂糖凝膠電泳既要求不高，而適應性又強，在過去15年里已成功地設計了形形色色及大大小小的電泳槽。對這些裝置的選擇主要是依據個人的喜惡。使用最普遍的裝置是Walter Schaffner發明的水
質粒DNA瓊脂糖凝膠電泳鑒定實驗
實驗材料 瓊脂糖試劑、試劑盒 溴化乙錠儀器、耗材 瓊脂糖凝膠電泳裝置紫外燈實驗步驟 1. ?瓊脂糖凝膠電泳裝置?由于瓊脂糖凝膠電泳既要求不高，而適應性又強，在過去15年里已成功地設計了形形色色及大大小小的電泳槽。對這些裝置的選擇主要是依據個人的喜惡。使用最普遍的裝置是Walter Schaffner
DNA重組技術(Recombinant－DNA)實驗原理、用品和步驟（二）
【實驗步驟】 1．PCR產物純化 PCR產物經瓊脂糖凝膠電泳，應用凝膠回收試劑盒回收純化目的DNA片段。 2．目的DNA片段連接至T/A克隆載體 即重組DNA分子的構建 反應體系及條件如下： 3．轉化 3.1 將感受態細胞置冰中融解。 3.2 將60μl感受態細胞移至無菌
質粒DNA的限制性內切酶酶切分析
實驗目的學習和掌握限制性內切酶的特性掌握對重組質粒進行限制性內切酶酶切的原理和方法并理解限制性內切酶是DNA重組技術的關鍵工具。相關基礎知識限制性核酸內切酶：是一類能識別雙鏈DNA分子特異性核酸序列的DNA水解酶。它是基因工程中用于體外剪切基因片段的重要工具酶。上世紀七十年代，當人們在對噬菌體的宿主
DNA文庫的構建及其篩選
實驗材料?DNA試劑、試劑盒?升汞MS培養基瓊脂糖EcoR IHind IIIBamH IBg lII Pst I儀器、耗材?電泳儀尼龍膜實驗步驟 1.水稻 DNA 的提取水稻 DNA 的提取參照 Dellaporta, Wood 和 Hicks (1983) 法分離總基因組DNA并略有修改。 通過
DNA的限制性酶切和瓊脂糖電泳
實驗原理1、DNA的限制性酶切限制性內切酶特異性地結合于一段被稱為限制酶識別序列的特殊DNA序列之內或其附近的特異位點上，并在此處切割雙鏈DNA。它可分為3類。I類和III類限制酶在同一蛋白質分子中兼有修飾（甲基化）作用和依賴ATP的限制（切割）活性（雙功能酶），II類修飾-限制系統是由兩種酶分子組
DNA酶切及凝膠電泳（gel－electrophoresis）2
三、試劑 1、5×TBE電泳緩沖液：配方見第一章。 2、6×電泳載樣緩沖液：0.25% 溴粉藍，40%(w/v) 蔗糖水溶液，貯存于 4℃。 3、溴化乙錠(EB)溶液母液:將EB配制成10mg/ml，用鋁箔或黑紙包裹容器，儲于 室溫即可。 第三節 操作步驟 一、
DNA的酶切與連接——質粒DNA酶切
DNA的連接和酶切可用于：（1）利用限制性核酸內切酶切割DNA和利用DNA連接酶連接DNA是DNA重組過程中的關鍵步驟之一；（2）成功的酶切和有效的連接為后續的外源基因進入宿主細胞進行表達提供了有效的實驗材料。實驗方法原理限制性內切酶能夠特異性地結合于一段被稱為限制性酶識別序列的DNA序列之內或其附
質粒的酶切后瓊脂糖凝膠電泳檢測
最好的酶切結果當然是只有兩條條帶，如果旁邊再跑一個沒有酶切的質粒和一個空載（同樣的載體但是沒有目的片段的質粒）作為對照那會很好說明問題：這兩條條帶應該是一條很明亮，位置較高（酶切下的線性載體），粗一些，理論上是下面那條比較細的條帶（切下的目的片段）的6倍亮度——這個可以根據跑的Marker判斷是否為
質粒DNA的限制性內切酶消化酶解
原理 限制性核酸內切酶能特異地識別雙鏈DNA中的堿基序列，通過“切割”雙鏈DNA中每一條鏈上的磷酸二酯鍵使DNA斷裂。利用它可方便地按需要對DNA進行“剪切”加工。限制性核酸內切酶單位的定義為：在限定的溫度和反應環境中，1小時消化1μg DNA所需的酶量為一個酶單
DNA限制性酶切及凝膠電泳，實驗原理及方法3
二、DNA分子量標準的制備采用EcoRⅠ或HindⅢ酶解所得的λDNA片段來作為電泳時的分子量標準。λDNA為長度約50kb的雙鏈DNA分子,其商品溶液濃度為0.5mg/ml,酶解反應操作如上述。HindIII切割 DNA后得到8個片段,長度分別為23.1, 9.4, 6.6, 4.4, 2.3,
DNA限制性酶切及凝膠電泳，實驗原理及方法1
實驗原理一. DNA的限制性內切酶酶切分析限制性內切酶能特異地結合于一段被稱為限制性酶識別序列的DNA序列之內或其附近的特異位點上,并切割雙鏈DNA。它可分為三類:Ⅰ類和Ⅲ類酶在同一蛋白質分子中兼有切割和修飾(甲基化)作用且依賴于ATP的存在。Ⅰ類酶結合于識別位點并隨機的切割識別位點不遠處的DNA，
重組質粒雙酶切鑒定
既然你的質粒已經提出來了，那么感受態、轉化等因素就不必再考慮了。 你看看雙酶切后載體的位置有幾條帶，如果是兩條，那說明酶切不完全，如果是一條，那說明酶切效率沒問題。 pET28a分子量為5.6k，你的插入片段為500bp，如果你的質粒完全切開，載體和插入片段的摩爾比為1：1，質量比就是5.6
如何通過瓊脂糖凝膠來鑒定質粒DNA的純度
質粒DNA分子具有三種構型：共價閉合環開DNA（cccDNA,SC構型）、開環DNA（OC構型）和線性分子（L構型）.在細菌體內,質粒DNA是以負超螺旋構型存在的.在瓊脂糖凝膠電泳中不同構型的的同一種質粒DNA,盡管分子量相同,但具有不同的電泳遷移率.其中跑在最前沿的是共價閉合DNA,其后依次是線性
如何通過瓊脂糖凝膠來鑒定質粒DNA的純度
我碩士專業是分子生物學這方面的,我可以很負責地告訴你,質粒DNA分子具有三種構型：共價閉合環開DNA（cccDNA,SC構型）、開環DNA（OC構型）和線性分子（L構型）.在細菌體內,質粒DNA是以負超螺旋構型存在的.在瓊脂糖凝膠電泳中不同構型的的同一種質粒DNA,盡管分子量相同,但具有不同的電泳遷
如何通過瓊脂糖凝膠來鑒定質粒DNA的純度
質粒DNA分子具有三種構型：共價閉合環開DNA（cccDNA,SC構型）、開環DNA（OC構型）和線性分子（L構型）.在細菌體內,質粒DNA是以負超螺旋構型存在的.在瓊脂糖凝膠電泳中不同構型的的同一種質粒DNA,盡管分子量相同,但具有不同的電泳遷移率.其中跑在最前沿的是共價閉合DNA,其后依次是線性
DNA酶切及凝膠電泳
一. DNA的限制性內切酶酶切分析限制性內切酶能特異地結合于一段被稱為限制性酶識別序列的DNA序列之內或其附近的特異位點上,并切割雙鏈DNA。它可分為三類:Ⅰ類和Ⅲ類酶在同一蛋白質分子中兼有切割和修飾(甲基化)作用且依賴于ATP的存在。Ⅰ類酶結合于識別位點并隨機的切割識別位點不遠處的DNA,而Ⅲ類酶
DNA酶切及凝膠電泳
第一節 概 述 一. DNA的限制性內切酶酶切分析 限制性內切酶能特異地結合于一段被稱為限制性酶識別序列的DNA序列之內或其附近的特異位點上，并切割雙鏈DNA。它可分為三類:Ⅰ類和Ⅲ類酶在同一蛋白質分子中兼有切割和修飾(甲基化)作用且依賴于ATP的存在。Ⅰ類酶結合于識別位點并隨機的切割識別位點不遠處
DNA酶切及凝膠電泳
實驗概要本文介紹了DNA酶切及凝膠電泳的實驗原理、儀器試劑和操作步驟等。實驗原理DNA分子在瓊脂糖凝膠中泳動時有電荷效應和分子篩效應。DNA分子在高于等電點的pH溶液中帶負電荷在電場中向正極移動。由于糖－磷酸骨架在結構上的重復性質，相同數量的雙鏈DNA幾乎具有等量的凈電荷，因此他們能以相同的速度向正
重組克隆篩選（酶切鑒定）
【實驗目的】1.掌握質粒提取的基本方法的原理；2.學習和掌握限制性內切酶的使用方法。【實驗原理】重組克隆的篩選和鑒定是基因工程中的重要環節之一。不同的克隆載體和相應的宿主系統，其重組克隆的篩選和鑒定方法不盡相同。從理論上說，重組克隆的篩選是排除自身環化的載體、未酶解完全的載體以及非目的DNA片斷插入
關于瓊脂糖凝膠塊中DNA的限制性內切酶消化的簡介
1．應使用消毒溶液及戴無菌手套以免DNA降解。 2．在Falcon試管中用1×TE溶液漂洗凝膠塊20min 3次，以去除EDTA。 3．混合：酶反應緩沖液（高、中或低鹽緩沖液），100mmol/L亞精胺（只用于高鹽緩沖液狀態），10～20單位的內切酶。20單位的內切酶就足以過夜完全消化10μ