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【實驗目的】 1.掌握盤狀聚丙烯酰胺凝膠電泳的基本原理。 2.學習盤狀聚丙烯酰胺凝膠電泳的操作技術，用于分離蛋白質。 【實驗原理】 聚丙烯酰胺凝膠電泳是以聚丙烯酰胺作為支持物的一種電泳形式。單體-丙烯酰胺和交聯劑-甲叉雙丙烯酰胺相互作用可形成聚丙烯酰胺，該聚合反應以TEMED作為催化劑，以APS 作為引發劑。 丙烯酰胺和甲叉雙丙烯酰胺的比例可決定凝膠網孔的大小，交聯劑所占比重越大，凝膠的網孔就越小。 利用聚丙烯酰胺凝膠電泳進行蛋白質分離主要依據以下兩個因素：蛋白質所帶靜電荷：在不同的pH條件下蛋白質所帶電荷不同。在一定的電場條件下蛋白質將向與其所帶電荷相反的電極方向移動，移動速率取決于蛋白質表面電荷的數量，電壓越強或電荷越多則蛋白質移動的越遠。其次，蛋白質的形狀和大小：蛋白質在電泳中所受的阻力主要取決于樣品的大小與凝膠網孔大小之間的關系。蛋白質分子越小或凝膠網孔越大......閱讀全文
2．分子篩效應分子量或分子大小和形狀不同的蛋白質通過一定孔徑分離膠時，受阻滯的程度不同而表現出不同的遷移率，這就是分子篩效應。經上述濃縮效應后，快、慢離子及蛋白質均進入pH8.9的同一孔徑的分離膠中。此時，高電壓消失，在均一的電壓梯度下，由于甘氨酸解離度增加，加之其分子量小，則有效泳動率增加，趕上并
電泳是指帶電粒子在電場中向異性電極移動的現象。例如蛋白質具有兩性電離性質，當溶液pH值大于蛋白質等電點時，蛋白質帶負電荷，在電場中向正極移動，反之則帶正電荷，向負極移動。當蛋白質溶液pH值與蛋白質的等電點相等，靜電荷為零則不移動。電泳技術常以有無支持物來分類。電泳中不用支持物在溶液中進行的電泳稱為自
（12）IgG的純度鑒定，可采用下列方法之一鑒定。①玻片瓊脂或醋酸纖維膜電泳均可加樣電泳后，只在γ—球蛋白的遷移部位出現一條帶。操作時，同時可用全血清樣品，不同濃度（NH4）2SO4鹽析樣品進行電泳，以資比較。②瓊脂雙相雙擴散鑒定預先準備該IgG免疫異種動物所獲的抗IgG血清。將IgG與抗IgG血清
以抗原免疫動物來制備的抗血清是一個非常復雜的混合物，包括血清的全部成分。但是同抗原特異性結合的抗體則主要是血清中的免疫球蛋白組分。通常用于制備酶標抗體或熒光抗體的免疫球蛋白必須高度純化并具有特異性，不應含有非抗體的血清蛋白。因此，為了濃縮和提高抗體的效價，或為制備免疫球蛋白特異性抗體時，通常也需要分
實驗概要實驗室中常用硫酸銨沉淀后過DEAE 纖維素柱，比較簡便可獲較純的抗體。下面以此方法為例介紹IgG的分離與提純。實驗原理以抗原免疫動物來制備的抗血清是一個非常復雜的混合物，包括血清的全部成分。但是同抗原特異性結合的抗體則主要是血清中的免疫球蛋白組分。通常用于制備酶標抗體或熒光抗體的免疫球蛋白必
⑴ 區帶電泳：玻片瓊脂或醋酸纖維膜電泳均可。加樣電泳后，只在γ—球蛋白的遷移部位出現一條帶。操作時，同時可用全血清樣品，不同濃度 (NH4)2SO4鹽析樣品進行電泳，以資比較。⑵ 瓊脂雙相雙擴散鑒定：預先準備該IgG免疫異種動物所獲的抗IgG血清。將IgG與抗 IgG血清進行雙相雙擴散，如IgG提純
免疫球蛋白（Immunoglobulin Ig）的含量代表著機體體液免疫的水平，并進一步代表著B細胞的功能，因此測定血清Ig含量可以推知機體的體液免疫功能和診斷某些疾病引起的Ig的過高和過低。 隨著免疫學的發展和需要，免疫球蛋白的純化和其成分的提純成為必不可少的手段。純化的方法很
免疫球蛋白提取技術 實驗方法原理 隨著免疫學的發展和需要，免疫球蛋白的純化和其成分的提純成為必不可
實驗方法原理 硫酸銨沉淀法可用于從大量粗制劑中濃縮和部分純化蛋白質。用此方法可以將主要的免疫球從樣品中分離，是免疫球蛋白分離的常用方法。高濃度的鹽離子在蛋白質溶液中可與蛋白質競爭水分子，從而破壞蛋白質表面的水化膜，降低其溶解度，使之從溶液中沉淀出來。各種蛋白質的溶解度不同，因而可利用不同濃度的鹽溶液
免疫球蛋白（Immunoglobulin Ig）的含量代表著機體體液免疫的水平，并進一步代表著B細胞的功能，因此測定血清Ig含量可以推知機體的體液免疫功能和診斷某些疾病引起的Ig的過高和過低。隨著免疫學的發展和需要，免疫球蛋白的純化和其成分的提純成為必不可少的手段。純化的方法很多，有單一法，但大多數
IgG的分離與提純實驗可以用于：制備酶標抗體或熒光抗體。實驗方法原理硫酸銨沉淀法可用于從大量粗制劑中濃縮和部分純化蛋白質。用此方法可以將主要的免疫球從樣品中分離，是免疫球蛋白分離的常用方法。高濃度的鹽離子在蛋白質溶液中可與蛋白質競爭水分子，從而破壞蛋白質表面的水化膜，降低其溶解度，使之從溶液中沉淀出
免疫球蛋白提取技術可應用于：（1）推知機體的體液免疫功能；（2）診斷某些疾病引起的Ig的過高和過低。實驗方法原理隨著免疫學的發展和需要，免疫球蛋白的純化和其成分的提純成為必不可少的手段。純化的方法很多，有單一法，但大多數采用二步法以上相結合的方法，特別是以硫酸銨提純為基礎，再經過層析柱的方法來提高免
實驗概要實驗室中常用硫酸銨沉淀后過DEAE 纖維素柱，比較簡便可獲較純的抗體。下面以此方法為例介紹IgG的分離與提純。實驗原理以抗原免疫動物來制備的抗血清是一個非常復雜的混合物，包括血清的全部成分。但是同抗原特異性結合的抗體則主要是血清中的免疫球蛋白組分。通常用于制備酶標抗體或熒光抗體的免疫球蛋白必
以抗原免疫動物來制備的抗血清是一個非常復雜的混合物，包括血清的全部成分。但是同抗原特異性結合的抗體則主要是血清中的免疫球蛋白組分。通常用于制備酶標抗體或熒光抗體的免疫球蛋白必須高度純化并具有特異性，不應含有非抗體的血清蛋白。因此，為了濃縮和提高抗體的效價，或為制備免疫球蛋白特異性抗體時，通常也需要分
電泳法電泳法是指帶電荷的供試品（蛋白質、核苷酸等）在惰性支持介質（如紙、醋酸纖維素、瓊脂糖凝膠、聚丙烯酰胺凝膠等）中，于電場的作用下，向其對應的電極方向按各自的速度進行泳動，使組分分離成狹窄的區帶，用適宜的檢測方法記錄其電泳區帶圖譜或計算其含量(%)的方法。各電泳法，除另有規定外，照下述方法操作。第
一、目的要求學習電泳原理和技術2.學習和掌握SDS－聚丙烯酰胺凝膠垂直板電泳分離蛋白質技術二、原理聚丙烯酰胺凝膠是由單體丙烯酰胺(acrylamide，簡稱Acr)和交聯劑 N,N-甲叉雙丙烯酰胺(N，N—methylene-bisacylamide，簡稱Bis)在加速劑N，N，N，N—四甲基乙
瓊脂糖凝膠電泳瓊脂糖凝膠電泳是一種以瓊脂糖凝膠為支持物的凝膠電泳，其分析原理與其它支持物電泳的最主要區別是：它兼有“分子篩”和“電泳”的雙重作用。瓊脂糖凝膠具有網絡結構，直接參與帶電顆粒的分離過程，在電泳中，物質分子通過空隙時會受到阻力，大分子物質在泳動時受到的阻力比小分子大，因此在凝膠電泳中，帶電
帶電顆粒在電場作用下向著與其電性相反的電極移動的現象稱為電泳。如帶正電荷的粒子向負極移動，帶負電荷的粒子向正極移動。電泳技術是生物化學與分子生物學中的重要研究方法之一，利用電泳技術可分離許多生物物質，包括氨基酸、多肽、蛋白質、脂類、核苷、核苷酸及核酸等，并可用于分析物質的純度和分子量的測定等。電泳的
【電泳法】是指帶電荷的供試品（蛋白質、核苷酸等）在惰性支持介質（如紙、醋酸纖維素、瓊脂糖凝膠、聚丙烯酰胺凝膠等）中，于電場的作用下，向其對應的電極方向按各自的速度進行泳動，使組分分離成狹窄的區帶，用適宜的檢測方法記錄其電泳區帶圖譜或計算其含量（%）的方法。 【分類】&n
血清蛋白質聚丙烯酰胺凝膠電泳實驗 實驗方法原理 血清蛋白質聚丙烯酰胺凝膠具有機械強度好、
實驗方法原理 血清蛋白質聚丙烯酰胺凝膠具有機械強度好、彈性大、透明、化學穩定性高、無電滲作用、設備簡單、用樣量少和分辨率高等優點，并可通過控制單體濃度或單體與交聯劑的比例聚合成孔徑大小不同的凝膠，用于蛋白質、核酸等物質的分離、定性和定量分析。根據凝膠形狀不同分為盤狀電泳和板狀電泳。盤狀電泳
血清蛋白質聚丙烯酰胺凝膠具有機械強度好、彈性大、透明、化學穩定性高、無電滲作用、設備簡單、用樣量少和分辨率高等優點，并可通過控制單體濃度或單體與交聯劑的比例聚合成孔徑大小不同的凝膠，用于蛋白質、核酸等物質的分離、定性和定量分析。實驗方法原理血清蛋白質聚丙烯酰胺凝膠具有機械強度好、彈性大、透明、化學穩
VI 凝膠層析法分離純化蛋白質一、目的了解凝膠層析的基本原理，并學會用凝膠層析分離純化蛋白質。二、原理凝膠層析也稱凝膠過濾、凝膠過濾層析、分子排阻層析和分子篩層析。凝膠是具有一定孔徑的網狀結構物質，凝膠層析是一種分子篩效應，主要用于分離分子大小不同的生物大分子以及測定其相對分子質量。相對分子質量小的
電泳法，是指帶電荷的供試品（蛋白質、核苷酸等）在惰性支持介質（如紙、醋酸纖維素、瓊脂糖凝膠、聚丙烯酰胺凝膠等）中，于電場的作用下，向其對應的電極方向按各自的速度進行泳動，使組分分離成狹窄的區帶，用適宜的檢測方法記錄其電泳區帶圖譜或計算其百分含量的方法。 電泳技術的
三、瓊脂糖凝膠電泳法1.儀器裝置電泳室及直流電源同紙電泳。2.試劑(1)醋酸－鋰鹽緩沖液(pH3.0)取冰醋酸50ml，加水800ml混合后，用氫氧化鋰調節pH至3.0，再加水至1000ml。(2)甲苯胺藍溶液取甲苯胺藍0.1g，加水100ml使溶解。3.操作法(1)制膠取瓊脂糖約0.2g，加水10
二、聚丙烯酰胺凝膠電泳原理聚丙烯酰胺凝膠電泳（polyacryamide gel electrophoresis，簡稱PAGE）根據其有無濃縮效應，分為連續系統與不連續系統2大類，前者電泳體系中緩沖液pH值及凝膠濃度相同，帶電顆粒在電場作用下，主要靠電荷及分子篩效應；后者電泳體系中由于緩沖液離子
（一）醋酸纖維素薄膜電泳 醋酸纖維素是提纖維素的羥基乙酰化形成的纖維素醋酸酯。由該物質制成的薄膜稱為醋酸纖維素薄 膜。這種薄膜對蛋白質樣品吸附性小，幾乎能完全消除紙電泳中出現的“拖尾”現象，又因為膜的親水性比較小，它所容納的緩沖液也少，電泳時電流的大部分由樣 品傳導，所以分離速度快，電泳時間短，樣品
四、聚丙烯酰胺凝膠電泳法1.儀器裝置通常由穩流電泳儀和圓盤或平板電泳槽組成。其電泳室有上、下兩槽,每個槽中都有固定的鉑電極，鉑電極經隔離電線接于電泳儀穩流擋上。2.試劑(1)溶液 A取三羥甲基氨基甲烷 36.6g，四甲基乙二胺0.23ml,加0.1mol/L鹽酸溶液48ml，再加水溶解并稀釋至 10
實驗概要本實驗介紹了聚丙烯酰胺凝膠電泳(圓盤電泳)的操作流程。實驗原理聚丙烯酰胺凝膠電泳是利用丙烯酰胺(acrylamide，Acr)與N，N亞甲基雙丙烯酰胺(N，Nmethylene bisacrylamide，Bis)在催化劑的作用下，聚合成大分子凝膠后，加樣，再進行電泳的一種方法。聚丙
這類病人應作以下檢查：①查24小時尿蛋白定量；②血、漿白蛋白和球蛋白；③血脂；④尿圓盤電泳；⑤內生肌酐清除率等。以了解每日尿中到底丟失了多少蛋白，血漿蛋白是否降低，以及降低程度？血脂是否增高？增高程度？ 若①尿蛋白每日丟失大于3.5克；②血漿蛋白小于3克％(最低可達1克％)；③血脂增高；④有水腫。