RTqPCR的原理
提取組織或細胞中的總RNA，以其中的mRNA作為模板，采用0ligo (dT)或隨機引物利用逆轉錄酶反轉錄成cDNA。再以cDNA為模板進行PCR擴增，而獲得目的基因或檢測基因表達。RT-PCR 使測的靈敏性提高了幾個數量級，使- - 些極為微量RNA樣品分析成為可能。該技術主要用于:分析基因的轉錄產物、獲取目的基因、合成cDNA探針、構建RNA高效轉錄系統。(一)反轉錄酶的選擇1.Moloney鼠白血病病毒(MMLV)反轉錄酶:有強的聚合酶活性，RNA酶H活性相對較弱。最適作用溫度為37°C。2.禽成髓細胞瘤病毒(AMV)反轉錄酶:有強的聚合酶活性和RNA酶H活性。最適作用溫度為42"C。3. Thermus thermophi lus、Thermus flavus 等嗜熱微生物的熱穩定性反轉錄酶:在Mn2存在下，允許高溫反轉錄RNA，以消除RNA模板的二級結構。4. MMLV 反轉錄酶的RNase H- 突變體:商......閱讀全文
RTqPCR的原理
提取組織或細胞中的總RNA，以其中的mRNA作為模板，采用0ligo (dT)或隨機引物利用逆轉錄酶反轉錄成cDNA。再以cDNA為模板進行PCR擴增，而獲得目的基因或檢測基因表達。RT-PCR 使測的靈敏性提高了幾個數量級，使- - 些極為微量RNA樣品分析成為可能。該技術主要用于:分析基因的轉錄
RTqPCR的原理
提取組織或細胞中的總RNA，以其中的mRNA作為模板，采用0ligo (dT)或隨機引物利用逆轉錄酶反轉錄成cDNA。再以cDNA為模板進行PCR擴增，而獲得目的基因或檢測基因表達。RT-PCR 使測的靈敏性提高了幾個數量級，使- - 些極為微量RNA樣品分析成為可能。該技術主要用于:分析基因的轉錄
RTqPCR需要注意的那些事
rt-qpcr需要注意的那些事，你都了解嗎？在rt-qpcr實驗中不論是實驗小白還是老司機，都會遇到各種不同的實驗問題。解決問題不僅要浪費額外的樣品和試劑，還要占用大量的時間一遍遍的重復和分析，真是被實驗折磨得焦頭爛額。那實驗過程中應該注意哪些細節呢？小翊精心為大家總結了rt-qpcr實驗的注意事項
HBV－RNA檢測技術盤點——RTqPCR－VS－RNA捕獲探針法
慢性乙型肝炎影響著世界上超過2.4億人口[1]，難以治愈已成為公認的事實。大多研究認為難以治愈與肝細胞核內HBV共價閉合環狀DNA（cccDNA）半衰期過長且難以清除有關。[2]因此，肝內檢測cccDNA對評估抗病毒治療療效和治療終點具有重要意義。但直接檢測cccDNA十分困難，通常需要進行肝組織活
一文掌握MIQE指南的RTqPCR發表數據的實用方法
考慮到mRNA轉錄的高度動態特性以及樣品處理和下游處理步驟中引入的潛在變量，RT-qPCR工作流程的每個步驟的標準化方法對于可靠和可重現的結果至關重要。MIQE為這種方法提供了一份包含85個參數的清單，以確保質量結果符合任何期刊的接受標準。接下來，小編將為大家詳細介紹如何應用MIQE指南來建立一個可
RTqPCR常用的SYBR@Green－I雙鏈DNA結合染料的應用
? ? ??隨著新冠病毒肆虐全球，聊病毒是個敏感話題。今天我們就從這個敏感話題著手，好好聊一聊。?? ? ? ?病毒是一種個體微小，結構簡單，只含一種核酸（DNA或RNA）。我們現在提起來就咬牙切齒的的新冠病毒（COVID-19），就是一種RNA病毒。當然除了COVID-19，我們常聽到的其他臭
JCM：4種埃博拉病毒檢測的性能評估
最新發表的一項研究評估了美國FDA緊急授權的4種埃博拉病毒檢測。這項研究由美國疾控中心、埃默里大學醫學院、內布拉斯加大學醫療中心等機構的研究人員開展，發表在《Journal of Clinical Microbiology》雜志上。 他們評估的檢測包括：美國CDC的NP2和VP40 RT-qP
Science子刊：一種檢測新冠病毒RNA的雙色RTLAMP檢測方法
新型冠狀病毒SARS-CoV-2導致2019年冠狀病毒病（COVID-19），如今正在全球肆虐。基于此，人類面臨著一項重大的公共衛生挑戰。快速檢測現有的SARS-CoV-2感染和評估病毒傳播至關重要。 基于逆轉錄環介導等溫擴增（reverse transcription loop-mediat
無需提取－直接檢測——Real－Time－PCR
針對客戶對實驗快速、高效率的需求，Takara不斷努力探索。2019年6月，Takara推出無需從糞便、血液、細胞等樣本中提取RNA，即可直接檢測樣本中目的基因的One Step Real Time PCR Premix試劑【PrimeDirect? Probe RT-qPCR Mix】（Cod
數字PCR技術更準確檢測新冠病毒
對于新型冠狀病毒（SARS-CoV-2）的檢測，實時定量PCR一直是金標準。不過對于某些患者，qPCR的結果似乎每天都在變化，而且有不少假陰性。近期的研究表明，ddPCR檢測能夠減少假陰性結果，而Bio-Rad Laboratories公司也利用其微滴式數字PCR系統開發出新型冠狀病毒的檢測產品
“條形碼”序列測序（BRBseq）廉價且高效
RNA測序是一種通過觀察基因表達來分析整個基因組的技術。如今，這種全基因組表達分析是基因組研究的標準工具，因為它們依賴于高通量技術，而這些技術本身已經變得廣泛可用。 盡管如此，RNA測序仍然是昂貴和費時的，因為它首先需要昂貴的準備一個完整的基因組庫——由細胞RNA生成的DNA池——同時數據本身
生物標志物研究與早期藥物研發基因表達分析功...（四）
FFPET 樣本特異性RealTime ready qPCR檢測潛在生物標志物假設檢驗我們使用的第一套臨床樣本來自于各種用于人類研究的福爾馬林固定、石蠟包埋（FFPE）組織。腫瘤來源的 FFPE? 組織是臨床試驗或生物標志物研究中，治療復合物研發最具有相關性的樣本材料。使用 High Pure
DSF群體淬滅及調控機制研究獲新進展
近日，華南農業大學群體微生物研究中心教授張煉輝團隊在DSF（diffusible signal factor）群體淬滅及調控機制方面取得新進展。他們報道了一個關鍵的調控因子RdmA及其調控的代謝基因簇dmgA-H在DSF群體淬滅過程中的重要作用。相關研究發表于mBio。博士后研究員王惠杉為該論文
RTPCR、QPCR、Realtime－PCR、realtime－RTPCR你真的區分的開嗎？
多少同學能將 RT-PCR、Realtime-PCR、QPCR區分開？有多少同學還在犯暈？今兒這貼，師兄就帶你區分區分，撥開那扇 PCR 迷霧。什么是?RT-PCR？RT-PCR就是逆轉錄 PCR（reverse transcription PCR）或者稱反轉錄PCR(reverse transcr
熒光定量PCR(qPCR)內參的選擇對基因表達差異分析結果的...
熒光定量PCR(qPCR)內參的選擇對基因表達差異分析結果的影響與應用實時熒光定量PCR技術是在常規PCR基礎上加入熒光標記探針或相應的熒光染料來實現其定量功能的。由于其精準度好、靈敏度高，在分子生物學研究和醫學研究等方面得到了廣泛的應用，尤其是在基因表達差異分析方面。基因表達差異分析一般是比較不同
美國FDA發布冷凍漿果中有害病毒抽樣檢測結果
據美國食品藥品監督管理局（FDA）消息，2019年9月26日，美國FDA發布關于對冷凍漿果進行有害病毒抽樣檢測的報告。 截至2019年6月30日，美國食品和藥物管理局已經檢測了253份國內冷凍漿果樣品和320份進口冷凍漿果樣品，使用定量即時聚合酶鏈鎖反應（RT-qPCR）方法在3個樣品中
實時定量PCR數據分析
所謂的實時熒光定量?PCR?就是通過對 PCR 擴增反應中每一個循環產物熒光信號的實時檢測從而實現對起始模板定量及定性的分析。在實時熒光定量 PCR 反應中，引入了一種熒光化學物質，隨著 PCR 反應的進行，PCR 反應產物不斷累計，熒光信號強度也等比例增加。每經過一個循環，收集一個熒光強度信號，這
miRNA的qPCR檢測
測序技術的引入促使miRNA研究領域進入快速發展階段，然而qPCR仍是驗證測序數據的重要標準。本文將為您介紹使用qPCR進行miRNA分析的基本要點，希望能幫助新人快速入門。什么是miRNA？miRNA是一類小的非編碼RNA，能夠與RNA誘導沉默復合物（RISC）結合，通過作用于mRNA，進而介導轉
20分鐘出核酸結果！985高校，再創新方法
近日，武漢大學團隊研究出一種新的核酸檢測方法，靈敏度高、特異性高、操作便捷，僅需20分鐘便能完成檢測。 在新冠病毒及變異毒株不斷傳播的背景下，快速篩查對于病源檢測、控制疫情的傳播十分重要。RT-qPCR是目前新冠病毒的檢測金標準，該方法特異性強、靈敏度高, 但由于其依賴于實驗室專業儀器的使用和
23分鐘！比同類檢測技術更快的新冠病毒檢測技術
30多年來，聚合酶鏈反應(PCR)一直是分子診斷測試的金標準，用于檢測來自病毒或人類DNA等遺傳物質。但是，包括逆轉錄聚合酶鏈反應(RT-PCR)在內的PCR大多是在大型的中央實驗室進行的，而不是在即時護理(POC)環境中進行的，因為其儀器笨重、昂貴、需要很長時間得出結果，并且需要訓練有素的技術人員
開門紅！珀金埃爾默預計第一季度營收將大幅增長98％
分析測試百科網訊 近日，珀金埃爾默預計今年第一季度營收將比去年同期的6.524億美元增長98％，至約12.9億美元。 這家總部位于馬薩諸塞州沃爾瑟姆的公司表示，本季度的有機收入預計將同比增長90％。此次增長是由整個公司的“廣泛動力”驅動的，截至4月4日的三個月，與COVID-19相關的收入就貢
實現新冠病毒單拷貝檢測的重點在Taq酶單克隆抗體的性能
假如您從事新冠核酸檢測體系的開發和評估，想問問您是否遇到過以下問題：??非特異性擴增、引物二聚體？??靈敏度上不去，檢出率低？??Taq酶性能不穩定，qPCR線性關系差？遇到這些問題莫要慌，翊圣Hieff??Taq酶單克隆抗體來救駕！?Hieff??Taq酶單克隆抗體高效封閉Taq酶的DNA聚合酶活
最新研究：新冠病毒能在92?C高溫下生存－但還有個難題...
法國科學家團隊的最新研究發現：新冠病毒可以在高溫環境下生存，在接近沸點的92?C高溫下，要15分鐘才能完全滅活。之前常用病毒滅活方案：60?C--1小時，56?C--30分鐘 均不能完全殺死新冠病毒。 之前，有研究表明，在高溫高濕的環境中，病毒的傳播速度會大大減弱。很多人甚至寄希望于夏天的高溫
新型冠狀病毒病原學檢測假陰性的產生原因及高效檢測...
新型冠狀病毒病原學檢測假陰性的產生原因及高效檢測方法分析自2020年開始，新型冠狀病毒肺炎的疫情就一直牽動著億萬人的心。截至2月11日8:29，全國已確診病例累計42708例，疑似21675例，疫情防控形勢依然嚴峻。?新型冠狀病毒傳播方式多樣，除了經呼吸道飛沫和接觸傳播的主要途徑外，目前已有報道病毒
實時定量PCR技術簡介
?技術方法簡介????? 所謂的實時熒光定量 PCR 就是 通過對 PCR 擴增反應中每一個循環產物熒光信號的實時檢測從而實現對起始模板定量及定性的分析。在實時熒光定量 PCR 反應中，引入了一種熒光化學物質，隨著 PCR 反應的進行，PCR 反應產物不斷累計，熒光信號強度也等比例增加。每經過一個循
美國科學家發布誘導多能干細胞成熟性的標準研究指南
研究人員開發了一個指南，幫助實驗室標準化從干細胞中產生成熟的類肝細胞(hepatic-like cells，HPCs)的方法，并將HPCs的基因表達與實際人體肝臟組織進行比較。這種中度的高通量的方案可以相對快速地評估干細胞分化的有效性，并有助于指導再生醫學應用中分化條件的優化。該操作指南及其影響
煙臺海岸帶所在海洋微生物還原Sb(V)研究中取得進展
環境中的銻（Sb）主要以三價和五價兩種形式存在，Sb的存在形態影響其毒性及遷移性。研究環境中Sb的形態轉化，有利于揭示Sb的環境地球化學循環規律和環境風險。理論上來說，Sb(V) 和Sb(III) 各自穩定存在于好氧和厭氧環境中。但是，在自然環境中，Sb(V) 和Sb(III) 也分別能在缺氧和
QIAGEN囊泡exosome－RNA的解決方案
exosome是直徑約為30-150nm的小囊泡，在30年前被人們所發現。exosome天然存在于所有體液中，包括血液、唾液、尿液和母乳，且其蛋白、RNA和脂肪成分特異，早期的研究認為，exosome執行蛋白運輸功能，特異靶定受體細胞，交換蛋白和脂類或引發下游信號事件。直到2007年，研究人員發現e
羅氏FFPET組織樣本抽提RNA試劑盒實驗結果分析
High?Pure?FFPET?RNA?Isolation?Kit基于離心柱法的抽提原理，在柱上直接進行高效DNase消化，在整合的實驗流程中方便地去除殘留DNA。圖1：抽提獲得寬泛的RNA片段范圍，FFPET?RNA抽提物片段長度范圍在100-4000bp 使用3中不同的方法從乳腺癌組織的5um?
免疫治療新靶點TNFR2（一）
在這個草長鶯飛的春天，是否記得那句“要想富，多栽樹”的宣傳標語？今天的植樹節，百奧賽圖知識拓展課堂攜智慧樹如期而至，與您攜手探尋TNFR2。?基本信息?基因功能簡介?TNFRSF1B（TNF receptor superfamily member 1b） 為TNF受體超家族成員, 也稱為TN