單克隆抗體的制備方法3
(4)融合 ①將骨髓瘤細胞與脾細胞按1:10或1:5的比例混合在一起,在50ml離心管中用無血清不完全培養液洗1次,離心,1200rpm,8min;棄上清,用吸管吸凈殘留液體,以免影響聚乙二醇(PEG)濃度。輕輕彈擊離心管底,使細胞沉淀略松動。 ②90s內加入37℃預溫的1ml 45%PEG(分子量4000)溶液,邊加邊輕微搖動。37℃水浴作用90s。 ③加37。C預溫的不完全培養液以終止PEG作用,每隔2min分別加入1ml、2ml、3ml、4ml、5ml和6ml。 ④離心,800rpm, 6min。 ⑤充上清,用含20%小牛血清HAT選擇培養液重懸。 ⑥將上述細胞,加到已有飼養細胞層的96孔板內,每孔加100μl。一般一個免疫脾臟可接種4塊96孔板。 ⑦將培養板置37℃、5%CO2培養箱中培養。 選擇雜交瘤細胞及抗體檢......閱讀全文
單克隆抗體的制備方法-3
(4)融合? ①將骨髓瘤細胞與脾細胞按1:10或1:5的比例混合在一起,在50ml離心管中用無血清不完全培養液洗1次,離心,1200rpm,8min;棄上清,用吸管吸凈殘留液體,以免影響聚乙二醇(PEG)濃度。輕輕彈擊離心管底,使細胞沉淀略松動。? ②90s內加入37℃預溫的1ml 45%PEG
單克隆抗體的制備方法-2
(2)飼養細胞:在組織培養中,單個或少數分散的細胞不易生長繁殖,若加入其它活細胞,則可促進這些細胞生長繁殖,所加入的這種細胞數被稱為飼養細胞。在制備McAb的過程中,許多環節 需要加飼養細胞,如在雜交瘤細胞篩選、克隆化和擴大培養過程中,加入飼養細胞是十分必要的。常用的飼養細胞有:小鼠腹腔巨噬細胞(較
單克隆抗體的制備方法-4
(5)在第7天換液,以后每2~3天換液1次。? (6)8~9天可見 細胞克隆形成,及時檢測抗體活性。? (7)將陽性孔的細胞移至24孔板中擴大培養。? (8)每個克隆應盡快凍存。? 2.軟瓊脂培養法克隆? (1)軟瓊脂的配制:含有20%NCS(小牛血清)的2倍濃縮的RPMI1640。?
單克隆抗體的制備方法-1
動物的選擇與免疫? 1.動物的選擇 純種BALB/C小鼠,較溫順,離窩的活動范圍小,體弱,食量及排污較小,一般環境潔凈的實驗室均能飼養成活。目前開展雜交瘤技術的實驗室多選用純種BALA/C小鼠。? 2.免疫方案 選擇合適的免疫方案對于細胞融合雜交的成功,獲得高質量的McAb至關重要。一般在
大量單克隆抗體的制備方法
目前制備大量單克隆抗體的方法主要有兩種:一種是動物體內誘生法;另一種是體外培養法。?背景BACKGROUND?困惑PUZZLED?體外培養法有哪幾種培養方式?何謂無血清培養?探索在體外培養法中,目前各個實驗室普遍采用細胞單層法,就是將雜交瘤細胞加入培養瓶中,用完全培養基培養,細胞濃度以1.0X100
單克隆抗體的制備
實驗方法原理使用聚二乙醇(PEG ) 將抗原免疫過的小鼠的脾細胞與骨髓瘤細胞(P3. 653 )進行融合。用 HAT 選擇性培養基篩選雜合的克隆株(雜交瘤細胞)。融合后 10~14 天用 ELISA 對上清液進行篩査(ELISA 篩査方法必須在融合前就已掌握),然后對理想的雜交瘤細胞加以擴增、冷凍和
單克隆抗體的制備
? ? ? ? ? ? 實驗方法原理 使用聚二乙醇(PEG ) 將抗原免疫過的小鼠的脾細胞與骨髓瘤細胞(P3. 653 )進行融合。用 HAT 選擇性培養基篩選雜合的克隆株(雜交瘤細胞)。融合后 10~14 天用 ELISA 對上清液進行篩査(ELISA 篩
單克隆抗體的制備
實驗方法原理 使用聚二乙醇(PEG ) 將抗原免疫過的小鼠的脾細胞與骨髓瘤細胞(P3. 653 )進行融合。用 HAT 選擇性培養基篩選雜合的克隆株(雜交瘤細胞)。融合后 10~14 天用 ELISA 對上清液進行篩査(ELISA 篩査方法必須在融合前就已掌握),然后對理想的雜交瘤細胞加
吲哚-3-乙酸的制備方法
由吲哚、甲醛與氰化鉀在150℃,0.9~1MPa下反應生成3-吲哚乙腈,再在氫氧化鉀作用下水解生成。或由吲哚與羥基乙酸反應而得。在3L不銹鋼高壓釜中,加入270g(4.1mol)85%在氫氧化鉀,351g(3mol)吲哚,然后慢慢地加入360g(3.3mol)70%的羥基乙酸水溶液。密閉加熱至250
單克隆抗體的制備過程
1.免疫動物免疫動物是用目的抗原免疫小鼠,使小鼠產生致敏B淋巴細胞的 過程。 一般選用6-8周齡雌性BALB/c小鼠,按照預先制定的免疫方案進行免疫注射。 抗原通過血液循環或淋巴循環進入外周免疫器官,刺激相應B淋巴細胞克隆,使其活化、增殖,并分化成為致敏B淋巴細胞。2.細胞融合采用二氧化碳氣體處死小