親和層析實驗：常規方法（二）
二、配基的選擇選擇合適的配基，需要對配基和靶分子之間的天然相互作用有一定的認知及理解。靶分子與配基的相互作用必須是特異性結合，并且在不同的結合和洗脫條件下均應該穩定。此外，制訂親和純化的方案時，需著重考慮能否購買到商品化配基，還是需要從頭研制配基和介質。后者的成功在很大程度上取決于對蛋白質結構和相互作用特性的已有認識，需要采用分子模建、化學合成和有機偶聯聯合以及對選擇性結合的分析。事實證明，設計一個新型配基、開發合適的偶聯化學作用和介質的時間和精力過于冗長和昂貴，因此這種情況下使用非親和純化技術可能是一個更好的選擇，如離子交換和疏水相互作用。1.設計和選擇配基的一般注意事項在開發一個新的親和純化材料時, 配基和靶分子之間的親和力是最重要的注意事項。低親和力會降低結合效率, 導致回收率下降。親和力過高，苛刻的洗脫條件會導致目標蛋白質洗脫效率低或使其滅活，進而降低回收率。一般來說，親和常量為 IO6~IO8mol-1 時, ......閱讀全文
親和層析實驗
可溶性抗原或膜結合抗原的分離 ? ? ? ? ? ? 實驗材料 蛋白質 試劑、試劑盒
親和層析實驗
實驗材料 蛋白質試劑、試劑盒 TrisTSA裂解緩沖液脫氧膽酸鈉洗滌緩沖液三乙醇氨緩沖液儀器、耗材 層析柱離心管離心機實驗步驟 1. ?準備一支活化后被淬滅的Sepharose預柱（5 ml 柱床）和一支Ab-Spharose免疫親和層析柱，并將它們串聯起來。2. ?以冰冷TSA溶液重懸50 g 細
親和層析的應用
親和色譜的用途很廣泛，可以用來從細胞提取物中分離純化核酸、蛋白，還可以從血漿中分離抗體。分離重組蛋白就經常使用親和色譜。通過基因修飾為蛋白加上一些人為的特性，這些特性使蛋白選擇性地與配體結合，從而達到分離的目的。親和色譜的另一大用途是從血漿中分離抗體。
親和層析凝膠指南
GE HealthcareBenzamidine Sepharose™ 6B is p-aminobenzamidine covalentlyattached to Sepharose 6B by the epoxy coupling method.p-Aminobenzamidine
親和層析的簡介
在生物分子中有些分子的特定結構部位能夠同其他分子相互識別并結合，如 酶與 底物的識別結合、受體與配體的識別結合、 抗體與 抗原的識別結合，這種結合既是特異的，又是可逆的， 改變條件可以使這種結合解除。生物分子間的這種結合能力稱為 親和力。親和層析就是根據這樣的原理設計的 蛋白質 分離純化方法。
親和層析技術
親和層析?????（一）原理????親和層析是一種吸附層析，抗原（或抗體）和相應的抗體（或抗原）發生特異性結合，而這種結合在一定的條件下又是可逆的。所以將抗原（或抗體）固相化后，就可以使存在液相中的相應抗體（或抗原）選擇性地結合在固相載體上，借以與液相中的其他蛋白質分開，達到分離提純的目的。????
免疫親和層析實驗
? ? ? ? ? ? 試劑、試劑盒 免疫親和介質 溴化氰（CNBr) 活化的 Sepharose 4B HCl 55% 飽和 AMS 沉淀物 偶聯緩沖液
親和層析法概述
親和層析法是利用生物大分子與某些對應的專一分子特異識別和可逆結合的特性而建立起來的一種分離生物大分子的色譜方法，也叫做生物親和或生物特異性親和色譜。這種特異可逆結合的物質很多，見表6–3。如抗原與抗體、底物與酶、激素與受體等，他們間的這種特異親和能力又叫親和力。親和色譜中，一對互相識別的分子互稱對方
免疫親和層析簡介
免疫親和層析（Immunoaffinity Chromatography，IAC），或免疫親和色譜，是利用生物體內存在的抗原、抗體之間高度特異性的親和力進行分離的方法。 親和層析的應用主要是生物大分子的分離、純化。下面簡單介紹一些親和層析技術用于純化各種生物大分子的情況。
免疫親和層析實驗
試劑、試劑盒免疫親和介質溴化氰（CNBr)活化的 Sepharose 4BHCl55% 飽和 AMS 沉淀物偶聯緩沖液乙醇胺緩沖液 BLAC 洗脫緩沖液二硫蘇糖醇硫氰酸鉀疊氮鈉儀器、耗材Econo-柱SDS-PAGE 電泳裝置實驗步驟材料與設備免疫親和介質（帶固定化的 MAb NT73; 見下文)溴