【銳賽小課堂】WB生物樣本總蛋白抽提
銳賽小課堂1222-158 一、貼壁細胞蛋白提取 A 1..將水浴鍋的溫度調至100℃，等水浴鍋達到100℃溫度后，取出需要收樣的細胞的培養皿或者孔板。 2.將緩沖液（1Xloading buffer）置于100℃水浴鍋中預熱10min。 （loding buffer： 是5Xloding buffer用純水稀釋到1Xlodingbuffer。廠家：碧云天；貨號： P0015L） 3.棄去細胞培養基，用PBS洗兩遍。 4.取預熱好的緩沖液1X loding加入到去除細胞培養液的細胞中，用細胞刮將細胞掛下收集到EP管。 （加入loding buffer的體積建議量，以細胞密度長到70%-80%，6孔板每孔加入120ul；150px皿200ul；250px皿300ul） 5.將收集好的細胞液轉移到EP管中，立即放入100℃煮15min。 6. B 1.倒掉培......閱讀全文
【銳賽小課堂】WB生物樣本總蛋白抽提
銳賽小課堂1222-158 一、貼壁細胞蛋白提取 A 1..將水浴鍋的溫度調至100℃，等水浴鍋達到100℃溫度后，取出需要收樣的細胞的培養皿或者孔板。 2.將緩沖液（1Xloading buffer）置于100℃水浴鍋中預熱10min。 （loding buffe
WB生物樣本總蛋白抽提
一、貼壁細胞蛋白提取A1..將水浴鍋的溫度調至100℃，等水浴鍋達到100℃溫度后，取出需要收樣的細胞的培養皿或者孔板。2.將緩沖液（1Xloading buffer）置于100℃水浴鍋中預熱10min。（loding buffer：?是5Xloding buffer用純水稀釋到1Xlodingbu
【銳賽小課堂】miRNA研究之RNA標記
RNA標記是將標記物（如放射性同位素、熒光素或酶）共價地連接到RNA，通過檢測標記物，進而實現對RNA鑒別和檢測的目的。RNA標記在分子探針領域應用廣泛，在疾病診斷方面也很有前景。 理想的RNA標記方法應符合以下要求： 1. 操作簡單，靈敏度高 2. 不影響堿基配對的特異性
【銳賽小課堂】熒光原位雜交技術實驗心得
銳賽小課堂1221-157 熒光原位雜交技術（ fluorescence in situ Hybridization,FISH）是一種非放射性原位雜交方法，用特殊的熒光素標記核酸探針，在細胞或組織切片標本上進行雜交，以檢測細胞內 DNA 或 RNA 特定序列存在與否。 FISH 實驗
【銳賽小課堂】如何看流式細胞術結果中的圖
銳賽小課堂1217-156 FCM數據的存貯的方式是FCS2.0（flow cytometry standard），采用列表排隊(List Mode)方式。易于加工處理分析，但缺乏直觀性，數據的顯示通常有一維直方圖、二維點圖、等高線圖、密度圖等幾種；由數據還可以做出標準曲線進行定量分析。
銳賽小課堂：關于IHC檢驗的分析驗證原則的指南推薦
日前，美國 CAP2014 年會上，美國病理家學會及實驗室質量中心發布了一項關于 IHC 檢驗的分析驗證原則的指南推薦（Principles of Analytic Validation of Immunohistochemical Assays），原文發表于近期 Arch Pathol Lab
【銳賽小課堂】搶救必備教程：關鍵時刻你會輸血嗎？
銳賽小課堂0911-135 輸血作為臨床上常用的替代性治療手段，起到了補充血容量、改善循環、增強免疫力和凝血功能等諸多神奇作用。但輸血過多會使機體出現各種酸堿平衡紊亂，甚至多器官臟器功能衰竭，輸血不足又不能起到預期的治療效果。 那么如何輸血才能把血用到刀刃上呢？ 血制品的種類
【銳賽小課堂】搶救必備教程：關鍵時刻你會輸血嗎？
銳賽小課堂0911-135 輸血作為臨床上常用的替代性治療手段，起到了補充血容量、改善循環、增強免疫力和凝血功能等諸多神奇作用。但輸血過多會使機體出現各種酸堿平衡紊亂，甚至多器官臟器功能衰竭，輸血不足又不能起到預期的治療效果。 那么如何輸血才能把血用到刀刃上呢？ 血制品的種類
【銳賽小課堂】搶救必備教程：關鍵時刻你會輸血嗎？
銳賽小課堂0911-135 輸血作為臨床上常用的替代性治療手段，起到了補充血容量、改善循環、增強免疫力和凝血功能等諸多神奇作用。但輸血過多會使機體出現各種酸堿平衡紊亂，甚至多器官臟器功能衰竭，輸血不足又不能起到預期的治療效果。 那么如何輸血才能把血用到刀刃上呢？ 血制品的種類
【銳賽小課堂】2015年癌癥領域突破性研究TOP10
長期以來，科學家們在揭示癌癥發病機制、開發治療和預防癌癥新型方法上花費了大量的精力，隨著研究的深入及多種機制的發現，科學家們讓癌癥變成了一種可控的疾病。 近日，來自美國德州農工健康科學中心研究所的科學家就發現西蘭花中名為蘿卜硫素的提取物或許可以幫助治療癌癥；又有研究者發現冥想也可以幫助癌癥
蛋白抽提指南（TRIZOL）
在用酒精沉淀出DNA（DNA抽提中的步驟一）后剩余的苯酚—乙醇上清中可以抽提出蛋白。沉淀的蛋白可通過蛋白[質]印跡法對樣品中某一特殊的蛋白質進行分析。試劑所需，但沒有隨同提供的物品：* 異丙醇* 0.3M鹽酸胍(用95%酒精配制)* 無水乙醇* 1% SDS1.蛋白質的沉淀用異丙醇從苯酚—乙醇上清中
【銳賽小課題】miRNA研究之動物總RNA的提取與電泳
動物總RNA的提取與電泳 I． 實驗目的與要求 A. 理解和掌握提取和純化動物總RNA的技術原理和操作方法。 B. 理解和掌握通過電泳鑒定提取所得的動物總RNA的技術原理和操作方法。 II． 實驗原理和背景知識 A. RNA是生命活動中基因表達過程非常重要的生物
植物總DNA的快速少量抽提實驗
CTAB法 ? ? ? ? ? ? 實驗方法原理 CTAB法：該方法簡便、快速，DNA產量高(純度稍次，適用于一般分子生物學操作)。?CTAB是一種非離子去污劑，植物材料在CTAB的
植物總DNA的快速少量抽提實驗
實驗方法原理 CTAB法：該方法簡便、快速，DNA產量高(純度稍次，適用于一般分子生物學操作)。 CTAB是一種非離子去污劑，植物材料在CTAB的處理下，結合65 °C水浴使細胞裂解、蛋白質變性、DNA被釋放出來。CTAB與核酸形成復合物，此復合物在高鹽（>0.7 mM）濃度下可溶，并穩
植物總DNA抽提方法和優缺點
1、植物DNA的CTAB提取法：經典方法。效果較好，污染少。多用于核基因組提取。2、SDS提取法：較為簡易，提取的為全基因組，但有蛋白污染可能。3、簡易“一管法”提取方法：4、PCR研究的快速提取法：以上兩者方法簡單，快速，但污染多，不適合做酶切等操作。5、酚類、多糖類物質較多的植物DNA提取法：多
樣本抽提中RNA降解的解決方法
從臨床樣本出發進行芯片、測序等高通量生物學研究是最常用的思路，但樣本采集過程受制于病理特征、病例數量等因素，耗時費力。無數期盼等來了期待中的臨床樣本，做個RNA抽提還常常…… 降解樣本的RNA完整度低，長鏈RNA變成了短鏈，在常規的擴增過程中會發生探針檢測的目的片段的丟失，導致芯片結果的不
樣本抽提中RNA降解的解決方法
從臨床樣本出發進行芯片、測序等高通量生物學研究是最常用的思路，但樣本采集過程受制于病理特征、病例數量等因素，耗時費力。無數期盼等來了期待中的臨床樣本，做個RNA抽提還常常……降解樣本的RNA完整度低，長鏈RNA變成了短鏈，在常規的擴增過程中會發生探針檢測的目的片段的丟失，導致芯片結果的不準確。遇到R
【銳賽小課題】染色體分離實驗
一、聚胺法分離染色質 試劑、試劑盒：秋水仙胺、聚胺緩沖液 實驗步驟： 有絲分裂中細胞的同步化 1. 37℃，用合適的含有 FCS，抗生素和其他必要成分的培養基培養細胞。 2. 收集有絲分裂細胞前 10~16 小時在培養基中以 0.06 μg/ml 的
蛋白質的抽提實驗
實驗材料 轉型菌株pQG11 M15 [pREP] 單一菌落試劑、試劑盒 LB amp kan液體培養基IPTGNa3PO4·12H2ONaClEDTATriton X-100液氮儀器、耗材 恒溫震蕩培養箱高速冷凍離心機離心管冰筒實驗步驟 一、儀器用具恒溫震蕩培養箱37℃；高速冷凍離心機及離心管 （
蛋白質的抽提實驗
? ? ? ? ? ? 實驗方法原理 蛋白質在細菌中表現后，以反復的冷凍-解凍方法打破細胞，再用硫酸銨把蛋白質沉淀下來，此步驟可以去除大部份核酸、多醣、脂質等雜物。 實驗材料 轉
水稻總DNA的快速少量抽提CTAB法
DNA分子是分子生物學研究的基本材料，依不同的實驗目的可采取不同的抽提方法獲取數量和質量不等的 DNA 。 實驗目的：了解植物 ?DNA 抽提的主要方法，掌握 CTAB 法快速抽提水稻 DNA 。 實驗材料及試劑： 水稻 ?葉片，1.5 × CTAB ，氯仿 / 異戊醇 (24:1) ，
DNA抽提
DNA抽提（主要內容如下）·???Working with DNA·???DNA Extraction from Bacteria and Other Organisms·???DNA Extraction from Cell and Tissue·???Mitochondria DNA Isola
核酸抽提
最糟糕的心態 - 實驗失敗了，抱怨試劑不好。實驗人員本來是應該擁有修正主義、機會主義、懷疑論等諸多“不完美的”意識，所以一定要用“完美的”自我批評意識來平衡。我為什么沒有一雙慧眼選擇可靠的供應商？我為什么不做預實驗檢測所購試劑？最糟糕的知識 - RNase A 的作用。RNase A 是內切酶，內切
核酸抽提
mRNA的分離?與rRNA和tRNA不同的是，哺乳動物細胞的絕大部分mRNA在其3'端均有一poly(A)尾，因此可以用oligo(dT)－纖維素親和層析法從大量的細胞RNA中分離mRNAdmonds等，1971;At Leder，1972）。在構建cDNA文庫時，?必須經上述純化步驟制
血與淚的RNA抽提抽提經驗
對大部分實驗人員來說，RNA 抽提比基因組 DNA 抽提要困難得多。事實上，現有的 RNA 抽提方法/試劑，如果用于從培養細胞中抽提 RNA，比抽提基因組 DNA 更方便，成功率也更高。那為什么同樣的方法用于組織 RNA 的抽提，總會碰到問題呢？組織 RNA 抽提失敗的兩大現象是： RNA 降解和組
植物總DNA的快速少量抽提實驗——CTAB法
DNA分子是分子生物學研究的基本材料，依不同的實驗目的可采取不同的抽提方法獲取數量和質量不等的DNA。實驗目的是了解植物DNA抽提的主要方法，掌握CTAB法快速抽提水稻DNA。實驗方法原理CTAB法：該方法簡便、快速，DNA產量高(純度稍次，適用于一般分子生物學操作)。?CTAB是一種非離子去污劑，
脂肪抽提對水解蛋白的影響
????? 由于魚類的蛋白質含量都是比較高的他們所含有的氨基酸和人類所需要的氨基酸成分是比較接近的，因為這類氨基酸的吸收率是比較高的，因此我們會經常說多吃魚類是補充蛋白質最好的途徑。魚類除了蛋白質含量高以外，還有就是脂肪酸的含量也是比較高的，這些我們需要通過脂肪抽提儀來完成測定，這樣對我們進行魚類營
蛋白質的抽提原理和方法
抽提是指利用某種溶劑使目的蛋白質和其他雜質盡可能分開的一種分離方法。其原理是不同蛋白質在某種溶劑中的溶解度不同，所以可以通過選擇溶劑，使得目的蛋白質溶解度大，而其他雜蛋白質溶解度小，然后經過離心，可以去除大多數雜蛋白質。方法：溶劑的選擇是抽提的關鍵，由于大多數蛋白質可溶于水、稀鹽、稀堿或稀酸，所以可
蛋白質的抽提原理和方法
抽提是指利用某種溶劑使目的蛋白質和其他雜質盡可能分開的一種分離方法。其原理是不同蛋白質在某種溶劑中的溶解度不同，所以可以通過選擇溶劑，使得目的蛋白質溶解度大，而其他雜蛋白質溶解度小，然后經過離心，可以去除大多數雜蛋白質。方法：溶劑的選擇是抽提的關鍵，由于大多數蛋白質可溶于水、稀鹽、稀堿或稀酸，所以可
RNA抽提經驗
對大部分實驗人員來說，RNA 抽提比基因組 DNA 抽提要困難得多。事實上，現有的 RNA 抽提方法/試劑，如果用于從培養細胞中抽提 RNA，比抽提基因組 DNA 更方便，成功率也更高。那為什么同樣的方法用于組織 RNA 的抽提，總會碰到問題呢？ ?組織 RNA 抽提失敗的兩大現象是：