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    【分享】降落PCR的原理及常見問題解答

    提問:降落PCR(Touchdown PCR)的原理?回答:Touchdown PCR是指每隔一個循環降低1°C反應退火溫度,直至達到“Touchdown”退火溫度,然后以此退火溫度進行10個左右的循環。該方法最初出現是為了避開確定最佳退火溫度而進行的復雜的反應優化過程。正確和非正確退火溫度之間的任何差異將造成每個循環PCR產物量的兩倍差異(每攝氏度造成4倍差異)。因此相對于非正確產物,正確的產物可以得到富集該方法的另一個應用是在確定已知序列肽的DNA序列。具體過程如下:使用兩套與已知序列肽兩末端可能配對的簡并引物,這只需要知道一段長為13個氨基酸的肽段序列,5’和3’引物各長18個堿基(6個氨基酸),兩者之間有一個堿基以上的間隔。使用簡并引物即可以進行“Touchdown PCR”。由這種方法將獲得大量的產物,但因為由肽序列可以知道引物之間的確切距離,所以可以根據產物的大小來選擇所需要的產物。該方法的優點在于可以富集引物與模板......閱讀全文

    【分享】降落PCR的原理及常見問題解答

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    降落PCR的原理及常見問題解答

    提問:降落PCR(Touchdown PCR)的原理?回答:Touchdown PCR是指每隔一個循環降低1°C反應退火溫度,直至達到“Touchdown”退火溫度,然后以此退火溫度進行10個左右的循環。該方法zui初出現是為了避開確定zui佳退火溫度而進行的復雜的反應優化過程。正確和非正確退火溫度

    PCR原理及常見問題解答

    PCR (Polymerase Chain Reaction),中文翻譯為聚合酶鏈式反應,是一種用于放大擴增特定的DNA片段的分子生物學技術,它可看作是生物體外的特殊DNA復制。 由1983年美國Mullis首先提出設想,1985年由其發明了聚合酶鏈反應,即簡易DNA擴增法,意

    PCR原理及常見問題解答

      PCR (Polymerase Chain Reaction),中文翻譯為聚合酶鏈式反應,是一種用于放大擴增特定的DNA片段的分子生物學技術,它可看作是生物體外的特殊DNA復制。 由1983年美國Mullis首先提出設想,1985年由其發明了聚合酶鏈反應,即簡易DNA擴增法,意味著PCR技術的真

    PCR Array 常見問題解答

    PCR Array FAQ:任何一臺能夠做QPCR的儀器據能夠做PCRarray嗎?QPCR 儀器都可以進行QPCR array的實驗。根據儀器采用的96孔或者384孔板,分為以下5種板型(plate format):plate formatInstrument providerQPCR instr

    抗體常見問題解答

      Q&A   常見問題:   如何選擇合適的一抗?   如何選擇合適的二抗?   如何選擇合適的同型對照?   如何選擇陽性對照?   如何確定一抗的稀釋比例?   如何選擇合適的抗原修復方式?   為何WB檢測條帶大小與預期有差別?   抗體能夠用于其他種屬/實驗

    抗體常見問題解答

      常見問題:   如何選擇合適的一抗?   如何選擇合適的二抗?   如何選擇合適的同型對照?   如何選擇陽性對照?   如何確定一抗的稀釋比例?   如何選擇合適的抗原修復方式?   為何WB檢測條帶大小與預期有差別?   抗體能夠用于其他種屬/實驗方法?  

    細胞常見問題解答

      1.原代細胞與細胞系有什么區別?   細胞培養物來源于原代外植體或分散的細胞懸液。通常在這樣的培養物中細胞增殖形成匯合地單層細胞或密集地細胞懸液。根據傳統定義,第一次收獲和接種的細胞被稱為原代細胞[Freshney, R.I. (1987). Culture of Animal Cells.

    qPCR 常見問題解答

      通常來講,real-time qPCR 的反應程序不需要像常規的 PCR 那樣,要變性、退火、延伸 3 步。由于其產物長度在 80~150 bp 之間,所以只需要變性和退火就可以了。   SYBR@Green 等染料法,最好在 PCR 擴增程序結束后,加一個溶解程序,來形成溶解曲線,判斷 PC

    [分享] [分享]培養基的制備、使用常見問題解答

      一、培養基的制備   正確制備培養基時微生物檢驗的最基礎步驟之一。使用脫水培養基和其他成分,尤其是含有有毒物質(如膽鹽或其他選擇劑)的成分時,應遵守良好實驗室規范和生產廠商提供的使用說明。培養基的不正確制備會導致培養基出現質量問題。   使用商品化脫水合成培養基制備培養基時,應嚴格按

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