知識分享：WesternBlot實驗方法及注意事項
實驗原理： WesternBlot印跡方法，又稱為免疫印記，是將獲得的蛋白質樣品通過SDS-聚丙烯酰胺凝膠電泳，對不同分子量的蛋白質進行分離，并通過轉移電泳將凝膠上分離到的蛋白質轉印至固相支持物（NC膜或PVDF膜）上，用抗靶蛋白的非標記抗體（一抗）與轉印后膜上的靶蛋白進行特異性結合，再與經辣根過氧化物酶標記（偶聯）的二抗結合，最后用ECL超敏發光液試劑檢測。如果轉印膜上含有靶蛋白，經X光片曝光、顯影后，則會在X-光片上出現特異性蛋白條帶。 實驗材料： 分離膠及積層膠溶液 、水飽和異丁醇 、1×Tris?Cl/SDS,pH8.8 、蛋白質分子量標準混合物 、1×SDS電泳緩沖液 、電泳裝置及夾子、玻璃板、灌膠支架、緩沖液槽等附件 、0.75mm封邊墊片 、0.75mm樣品梳子 、50μl微量加樣器 、恒流電源 常用試劑： 1）30%丙烯酰胺/0.8% N,N’-亞甲丙烯酰胺 將30克丙烯酰......閱讀全文
知識分享：WesternBlot實驗方法及注意事項
實驗原理： WesternBlot印跡方法，又稱為免疫印記，是將獲得的蛋白質樣品通過SDS-聚丙烯酰胺凝膠電泳，對不同分子量的蛋白質進行分離，并通過轉移電泳將凝膠上分離到的蛋白質轉印至固相支持物（NC膜或PVDF膜）上，用抗靶蛋白的非標記抗體（一抗）與轉印后膜上的靶蛋白進行特異性結合，再與
WesternBlot實驗方法及注意事項
實驗原理：WesternBlot印跡方法，又稱為免疫印記，是將獲得的蛋白質樣品通過SDS-聚丙烯酰胺凝膠電泳，對不同分子量的蛋白質進行分離，并通過轉移電泳將凝膠上分離到的蛋白質轉印至固相支持物（NC膜或PVDF膜）上，用抗靶蛋白的非標記抗體（一抗）與轉印后膜上的靶蛋白進行特異性結合，再與經辣根過氧化
Westernblot實驗步驟及注意事項
Westernblot 實驗步驟?1. 組織塊稱重?2. 利用液氮、研缽粉碎組織塊?3. 加入RIPA緩沖液（每克組織3 ml RIPA），PMSF（每克組織30μl，10 mg/ml PMSF），利用Polytron進一步勻漿（15,000轉/分*1分鐘）維持4℃4. 加入PMSF（每克組織30μ
知識分享：質粒提取實驗步驟
實驗原理 現在較常用的質粒提取方法有三種:堿裂解法、煮沸法和去污劑裂解法，前兩種方法較為劇烈，適用于較小的質粒（＜15Kb），而去污劑裂解法則比較溫合，一般用于分子量較大的質粒（＞15Kb）。 堿裂解法是一種最廣泛使用的制備質粒DNA的方法。其原理為：染色體DNA遠大于質粒DNA，且
知識分享：細胞轉染原理及常見轉染方法的比較
實驗原理： 轉染是將外源性基因導入細胞內的一種專門技術。隨著基因與蛋白功能研究的深入，轉染目前已成為實驗室工作中經常涉及的基本方法。 常規轉染技術可分為兩大類,一類是瞬時轉染,一類是穩定轉染（永久轉染）。前者外源 DNA /RNA不整合到宿主染色體中,因此一個宿主細胞中可存在多個拷貝
知識分享：細胞傳代、培養的方法
實驗原理： 將動物機體的各種組織從機體中取出，經各種酶（常用胰蛋白酶）、螯合劑（常用EDTA）或機械方法處理，分散成單細胞，置合適的培養基中培養，使細胞得以生存、生長和繁殖，這一過程稱原代培養。 細胞在培養瓶長成致密單層后，已基本上飽和，為使細胞能繼續生長，同時 也將細胞數量擴大，就
WesternBlot實驗背景高原因分析及解決辦法
膜沒有完全均勻濕透,建議 使用100% methanol浸透膜；洗膜不充分，可以增加洗液體積和洗滌次數；電極不平衡或者加樣位置偏斜，可以調整電極和加樣；封閉物用量不足，可以提高封閉物濃度，孵育時保證封閉液完全浸沒轉印膜；封閉物使用不當，比如檢測生物素標記的蛋白時不可用脫脂奶粉封閉；封閉時間不夠，一般
知識分享：SDS-PAGE的配制及電泳
實驗原理 SDS聚丙烯酰胺凝膠電泳技術首先在1967年由Shapir0建立，其原理：聚丙烯酰胺凝膠是由丙烯酰胺(簡稱Acr)和交聯劑N，N’一亞甲基雙丙烯酰胺(簡稱Bis)在催化劑過硫酸銨(APS)，N，N，N’，N’四甲基乙二胺(TEMED)作用下，聚合交聯形成的具有網狀立體結構的凝膠，
知識分享：蛋白質含量的測定方法
實驗原理： 蛋白質含量測定法，是生物化學研究中最常用、最基本的分析方法之一。目前常用的有四種古老的經典方法，即定氮法、雙縮尿法（Biuret法）、Folin－酚試劑法（Lowry法）和紫外吸收法。另外還有一種近十年才普遍使用起來的新的測定法，即考馬斯亮藍法（Bradford法）。其中Bra
Westernblot法實驗所需儀器
伯樂生命bio-rad-Trans-Blot 轉印槽是一種多功能儀器,適用于多種Westernblot法應用。功能和優點:能進行多膠轉印多組參數靈活可設,可調節的電壓設置(從30V的過夜轉印到到 200 V的1 小時快速實驗)。電極間距設置為8cm可用于標準轉印,設置為4cm用于高強度轉印。采用特級