細胞培養的基本技術
一、清洗新采用和重新使用的培養器皿，都要嚴格清洗，以防各種有害物質對培養細胞損害。培養用的塑料器皿目前主要依靠進口，均已無菌密封包裝，可直接使用。對于塑料瓶蓋或膠塞等，可水中浸泡后用2％NaOH煮沸10～20min，自來水中浸泡和蒸餾水漂洗2～3次，晾干備用。細胞培養中的絕大部分器皿系玻璃制品，清洗過程為以下步驟。1. 浸泡 新使用或重復使用的玻璃器皿須經5％鹽酸溶液或自來水浸泡過夜或煮沸30min，水洗。以去除新購進玻璃器皿所帶有灰塵、鉛、砷等物質，并消除其弱堿性。2． 刷洗 浸泡后用軟毛刷和優質的洗潔精進行刷洗。3． 酸浸 刷洗后的玻璃制品酸浸前須適當晾干或烘干，以免造成酸浸液稀釋，影響效果。將玻璃制品完全浸泡入清潔液中24h。清潔液具有極強酸蝕作用，操作過程需戴防護用具。4． 沖洗 浸酸后的玻璃器皿先用自來水充分沖洗，吸管需沖洗10min，器皿需每瓶灌滿自來水、倒掉反復10次以上，不殘余任何酸浸液殘跡，然后用蒸餾水漂洗2～......閱讀全文
細胞培養的基本技術
一、清洗新采用和重新使用的培養器皿，都要嚴格清洗，以防各種有害物質對培養細胞損害。培養用的塑料器皿目前主要依靠進口，均已無菌密封包裝，可直接使用。對于塑料瓶蓋或膠塞等，可水中浸泡后用2％NaOH煮沸10～20min，自來水中浸泡和蒸餾水漂洗2～3次，晾干備用。細胞培養中的絕大部分器皿系玻璃制品，清洗
細胞培養基本技術
實驗概要無菌操作基本技術?1. 實驗進行前，無菌室及無菌操作臺(laminar flow) 以紫外燈照射30-60 分鐘滅菌，以70 % ethanol 擦拭無菌操作抬面，并開啟無菌操作臺風扇運轉10 分鐘后，才開始實驗操作。每次操作只處理一株細胞株，且即使培養基相同亦不共享培養基，以避免失
實驗技術：細胞培養基本技術
一、操作規程：1.實驗前,無菌室及無菌操作臺用紫外燈照射30-60分鐘滅菌,用70％酒精擦拭無菌操作臺面,并開啟無菌操作臺風機運轉10分鐘后,才可開始實驗操作.每次操作只處理一株細胞,以免造成細胞交叉污染.實驗結束后,將實驗物品帶出工作臺。如需要繼續進行下一個實驗,則用70％酒精擦拭無菌操作臺面,再
實驗技術：細胞培養基本技術
細胞培養 一、操作規程： 1.實驗前,無菌室及無菌操作臺用紫外燈照射30-60分鐘滅菌,用70％酒精擦拭無菌操作臺面,并開啟無菌操作臺風機運轉10分鐘后,才可開始實驗操作.每次操作只處理一株細胞,以免造成細胞交叉污染.實驗結束后,將實驗物品帶出工作臺。如需要繼續進行下一個實驗,則用
細胞培養基本技術概述（二）
培養基 ?1. 液體培養基貯存于4 oC 冰箱，避免光照，實驗進行前放在37 oC 水槽中溫熱。 2. 液體培養基(加血清) 存放期為六個月，期間glutamine 可能會分解，若細胞生長不佳，可以再添加適量glutamine。 ?3. 粉末培養基配制(以1 升為例)： ?3.1. 細胞培
細胞培養基本技術概述（七）
冷凍細胞活化 1. 冷凍細胞之活化原則為快速解凍，以避免冰晶重新結晶而對細胞造成傷害，導致細胞之死亡。 2. 細胞活化后，約需數日，或繼代一至二代，其細胞生長或特性表現才會恢復正常(例如產生單株抗體或是其它蛋白質)。 3. 材料 3.1 37 oC 恒溫水槽 3.2 新鮮培養基 3.3 無菌吸管/
細胞培養基本技術概述（一）
無菌操作基本技術 ?1. 實驗進行前，無菌室及無菌操作臺(laminar flow) 以紫外燈照射30-60 分鐘滅菌，以70 %ethanol 擦拭無菌操作抬面，并開啟無菌操作臺風扇運轉10 分鐘后，才開始實驗操作。每次操作只處理一株細胞株，且即使培養基相同亦不共享培養基，以避免失誤混淆或
細胞培養基本技術概述（六）
抗生素 1. 細胞庫之細胞培養基不加抗生素 1.1. 培養自ATCC 引進之細胞株，培養基中不加抗生素。 1.2. 培養自其它實驗室引進之細胞株，制作token freeze 前培養基須添加抗生素，待token freeze 通過污染測試后，大量培養時則不加抗生素。 2. 寄送活細胞時，須將培養液充
細胞培養基本技術概述（三）
血清 ?1. 血清必須貯存于–20 ～ -70 oC，若存放于4 oC，請勿超過一個月。如果一次無法用完一瓶，可將40～45 ml 分裝于無菌50 ml 離心管中，由于血清結凍時體積會增加約10 %，必須預留此膨脹體積之空間，否則易發生污染或容器凍裂之情形。 ?2. 一般廠商提供之血清為無菌，不需再
細胞培養基本技術概述（四）
細胞傳代培養 ?1. 細胞生長至高密度時，即須分殖至新的培養瓶中，一般稀釋比例為1:3 至1:6，依細胞種類而異。 ?2. 材料： ?2.1. 無菌磷酸生理緩沖液(Dulbecco’s phosphate-buffered saline, Ca++/Mg++ free, D-PBS,GibcoBRL
細胞培養基本技術概述（五）
實驗用品 1. 種類︰ 1.1. 細胞培養實驗用品均為無菌，除了玻璃容器與pasteur pipet 外，其它均為塑料無菌 制品。 1.2. TC 級培養盤表面均有coating 高分子物質以讓細胞吸附，培養容器種類有Tflask, plates, dishes, roller bottle 等，依
細胞分離技術是細胞培養的基本方法
從原代組織中分離細胞 將組織塊分離（散）成細胞懸液的方法有多種，最常用的是機械解離細胞法、酶學解離細胞法以及螯合劑解離細胞法。從原代組織中獲得單細胞懸液的一般方法是酶解聚。細胞暴露在酶中的時間要盡可能的短，以保持最大的活性。下列步驟可以解聚整個組織，獲得較高產量的有活性細胞。1.胰蛋白酶 (Tryp
細胞培養的基本原理與技術
現代生物技術一般認為包括基因工程技術、細胞工程技術、酶工程技術和發酵工程技術，而這些技術的發展幾乎都與細胞培養有密切關系，特別是在醫藥領域的發展，細胞培養更具有特殊的作用和價值。比如基因工程藥物或疫苗在研究生產過程中很多是通過細胞培養來實現的。基因工程乙肝疫苗很多是以CHO細胞作為載體；細胞工程中更
細胞培養的基本方法細胞分離技術（一）
細胞分離技術一、從原代組織中分離細胞 將組織塊分離（散）成細胞懸液的方法有多種，最常用的是機械解離細胞法、酶學解離細胞法以及螯合劑解離細胞法。從原代組織中獲得單細胞懸液的一般方法是酶解聚。細胞暴露在酶中的時間要盡可能的短，以保持最大的活性。下列步驟可以解聚整個組織，獲得較高產量的有活性細胞。1.胰蛋
細胞培養的基本方法細胞分離技術（二）
1.懸浮細胞 ●計數將要凍存的活細胞。細胞應該處于對數生長期。以大約200～400g離心5分鐘沉淀細胞，使用移液管移去上清到最小體積，不要攪亂細胞。 ●以1×107到5×107細胞/ml密度，在包含有血清的冷凍培養基中再次懸浮細胞，或者以0.5×107到1×107在無血清培養基中，再次懸浮細胞。 ●
概述細胞培養的基本原理與技術
現代生物技術一般認為包括基因工程技術、細胞工程技術、酶工程技術和發酵工程技術，而這些技術的發展幾乎都與細胞培養有密切關系，特別是在醫藥領域的發展，細胞培養更具有特殊的作用和價值。比如基因工程藥物或疫苗在研究生產過程中很多是通過細胞培養來實現的。基因工程乙肝疫苗很多是以CHO細胞作為載體；細胞工程
ncm460細胞細胞培養的基本技術（二）消毒
、消毒1. 包裝 器材經清洗烤干或晾干后，先應嚴格包裝，然后再行消毒滅菌處理，以防止消毒滅菌后再次遭受污染。包裝材料常用包裝紙、牛皮紙、硫酸紙、棉布、鋁飯盒、玻璃或金屬制吸管筒、紙繩等。2. 消毒 消毒滅菌隨物品的不同，而采用不同的方法。（1）紫外線：主要用于消毒實驗室空氣、工作臺面和一些不能使用其
代做實驗|細胞培養技術的基本原理
細胞培養是用酶消化法將組織碎塊分離成單個細胞，用培養基制成細胞懸液，在體外適宜條件下，使細胞生長繁殖，并保留其一定的結構和功能特性。細胞培養與組織培養、器官培養主要不同點在于原始培養的對象不同。細胞培養使用的是單個細胞懸液，組織培養使用的是組織塊（0.5~1立方毫米）或薄片（厚0.2毫米），而器官培
代做實驗|細胞培養技術的基本原理
細胞培養是用酶消化法將組織碎塊分離成單個細胞，用培養基制成細胞懸液，在體外適宜條件下，使細胞生長繁殖，并保留其一定的結構和功能特性。細胞培養與組織培養、器官培養主要不同點在于原始培養的對象不同。細胞培養使用的是單個細胞懸液，組織培養使用的是組織塊（0.5~1立方毫米）或薄片（厚0.2毫米），而
細胞培養技術的細胞培養方式
高等生物是由多細胞構成的整體，在整體條件下要研究單個細胞或某一群細胞在體內（in vivo）的功能活動是十分困難的。但是如果把活細胞拿到體外（in vitro）培養進行觀察和研究，則要方便得多。活細胞離體后要在一定的生理條件下才能存活和進行生理活動，特別是高等動植物細胞要求的生存條件極其嚴格，稍有不
細胞培養技術的技術分類
動物細胞培養高速冷凍離心機在所有的細胞離體培養中，最困難的是動物細胞培養。下面是它所需要的特殊條件。⑴血清：動物細胞離體培養常常需要血清。最常用的是小牛血清。血清提供生長必需因子，如激素、微量元素、礦物質和脂肪。在這里，血清等于是動物細胞離體培養的天然營養液。⑵支持物：大多數動物細胞有貼壁生長的習慣
細胞培養的基本條
細胞培養是指從體內組織取出細胞在體外模擬體內環境下，使其生長繁殖，并維持其結構和功能的一種培養技術。細胞培養的培養物可以是單個細胞，也可以是細胞群。以下是細胞培養的基本條件：?一、合適的細胞培養基?合適的細胞培養基是體外細胞生長增殖的重要的條件之一，培養基不僅提供細胞營養和促使細胞生長增殖的基礎物質
細胞培養技術
實驗概要細胞培養是指從體內組織取出細胞摹擬體內出現環境，在無菌、適當溫度及酸堿度和一定營養條件下，使期生長繁殖，并維持其結構和功能的一種培養技術。細胞培養的培養物為單個細胞或細胞群。主要設備細胞培養設施和基本條件 1、實驗室設計 細胞培養是一種無菌操作技術，要求工作環境和條件必須保證無微生物污染
細胞實驗技術及細胞培養基本知識2
（二）人類淋巴母細胞建株方法1、4ml肝素抗凝血于離心管中，加入2ml RPMI 1640。 2、混勻后沿管壁緩慢加到預置有4ml淋巴細胞分離液的液面上靜置30min。 3、1500rpm，15min，吸取白細胞層（第二層）于另一離心管中。 4、加RPMI 1640 5ml洗滌白細胞兩次。
細胞實驗技術及細胞培養基本知識1
細胞培養技術細胞周期的測定一、原理細胞周期指細胞一個世代所經歷的時間。從一次細胞分裂結束到下一次分裂結束為一個周期。細胞周期反應了細胞增殖速度。 單個細胞的周期測定可采用縮時攝影的方法，但它不能代表細胞群體的周期，故現多采用其他方法測群體周期。 測定細胞周期的方法很多，有同位素標記法、細胞計數法
細胞實驗技術及細胞培養基本知識3
三、神經膠質細胞培養神經細胞（神經元）不易培養，只有在適宜情況下，如接種在膠原底層上，或加入神經生長因子和膠質細胞因子時，可出現一定程度的分化，長出突起等現象，但很難使之增值。而神經膠質細胞是神經組織中比較容易培養的成分。人、鼠等腦組織即可用于神經膠質細胞培養，不僅能獲得生長的膠質細胞，也可形成能傳
單細胞培養的基本介紹
單細胞培養(single cell culture)是指從植物器官、愈傷組織或懸浮培養物中游離出單個細胞，在無菌條件下，進行體外生長、發育的技術。人們分離和培養植物單細胞的設想和實踐都比較早，但成功地進行單細胞培養是隨著更有效的培養基的發展以及從愈傷組織懸浮培養物分離單細胞的專門技術的建立才實現
細胞培養的基本方法（二）
第四節 細胞計數及活力測定一、原理 培養的細胞在一般條件下要求有一定的密度才能生長良好，所以要進行細胞計數。計數結果以每毫升細胞數表示。細胞計數的原理和方法與血細胞計數相同。在細胞群體中總有一些因各種原因而死亡的細胞，總細胞中活細胞所占的百分比叫做細胞活力，由組織中分離細胞一般也要檢查活力，以了解分
細胞培養技術的分類
動物細胞培養在所有的細胞離體培養中，最困難的是動物細胞培養。下面是它所需要的特殊條件。⑴血清：動物細胞離體培養常常需要血清。最常用的是小牛血清。血清提供生長必需因子，如激素、微量元素、礦物質和脂肪。在這里，血清等于是動物細胞離體培養的天然營養液。⑵支持物：大多數動物細胞有貼壁生長的習慣。離體培養常用
細胞培養的概念及細胞培養的技術特點
細胞培養（cell culture）是指在體外模擬體內環境（無菌、適宜溫度、酸堿度和一定營養條件等），使之生存、生長、繁殖并維持主要結構和功能的一種方法。細胞培養也叫細胞克隆技術，在生物學中的正規名詞為細胞培養技術。不論對于整個生物工程技術，還是其中之一的生物克隆技術來說，細胞培養都是一個必不可少的