知識分享：維真CreloxP重組系統腺相關病毒產品說明
一．Cre-loxP重組系統作用原理 Cre重組酶和loxP位點 Cre重組酶（Cyclization Recombination Enzyme）由大腸桿菌噬菌體P1的Cre基因編碼，是由343個氨基酸組成的38kD的蛋白質。它不僅具有催化活性，而且與限制酶相似，能夠特異性識別loxP位點。 LoxP（locus of X-overP1）位點長為34bp，包括兩個13bp的反向重復序列和一個8bp的間隔區域。其中，反向重復序列是Cre重組酶的特異識別位點，而間隔區域決定了loxP位點的方向。 圖1. Cre重組酶和loxP位點 （http://2012.igem.org/Team:Tsinghua-A/Project/Design） Cre-loxP重組系統誘導基因重組的方式 Cre-loxP系統存在幾種誘導重組的方式，這是基于Cre重組酶與loxP位點的相互作用而實現的。 當基因組內存在loxP位點時，一......閱讀全文
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一．Cre-loxP重組系統作用原理 Cre重組酶和loxP位點 Cre重組酶（Cyclization Recombination Enzyme）由大腸桿菌噬菌體P1的Cre基因編碼，是由343個氨基酸組成的38kD的蛋白質。它不僅具有催化活性，而且與限制酶相似，能夠特異性識別loxP位點。
什么是腺相關病毒？
腺相關病毒（adeno-associated virus，AAV）,也稱腺伴隨病毒,屬于微小病毒科依賴病毒屬,是目前發現的一類結構最簡單的單鏈DNA缺陷型病毒，需要輔助病毒（通常為腺病毒）參與復制。它編碼兩個末端的反向重復序列（ITR）中的cap和rep基因。ITRs對于病毒的復制和包裝具有決定
腺相關病毒的簡介
腺相關病毒（adeno-associated virus，AAV）,也稱腺伴隨病毒,屬于微小病毒科依賴病毒屬,是目前發現的一類結構最簡單的單鏈DNA缺陷型病毒，需要輔助病毒（通常為腺病毒）參與復制。它編碼兩個末端的反向重復序列（ITR）中的cap和rep基因。ITRs對于病毒的復制和包裝具有決定性作
知識分享：維真腺病毒系統產品手冊
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腺相關病毒的載體特點
安全性好對肌肉、肝臟、神經組織等感染效率高載體自身免疫原性低長期表達比較穩定,易于保存和運輸缺點：容量較小
腺相關病毒的應用介紹
重組腺相關病毒載體(rAAV) 源于非致病的野生型腺相關病毒，由于其安全性好、宿主細胞范圍廣(分裂和非分裂細胞)、免疫源性低，在體內表達外源基因時間長等特點，被視為最有前途的基因轉移載體之一，在世界范圍內的基因治療和疫苗研究中得到廣泛應用。經過10余年的研究，重組腺相關病毒的生物學特性己被深入了解，
腺相關病毒載體的簡介
腺病毒相關病毒(adeno-associated virus，AAV)是一類單鏈線狀DNA缺陷型病毒。其基因組DNA小于5 kb，無包膜，外形為裸露的20面體顆粒。AAV不能獨立復制，只有在輔助病毒（如腺病毒、單純皰疹病毒、痘苗病毒）存在時，才能進行復制和溶細胞性感染，否則只能建立溶源性潛伏感染
腺相關病毒包裝(AAV)介紹
腺相關病毒(AAV)是最初發現的作為腺病毒載體污染物的小型病毒。利用AAV進行研究的一個主要優勢是它的復制能力有限，并且通常不會導致人類疾病。由于這些原因，AAV通常被包含在較低的生物安全水平，并引發相對較低的免疫效應在活生物體內。雖然AAV可以在BSL-1處理，但表達癌基因或毒素的AAV應該在BS
病毒包裝技術——腺相關病毒(AAV)包裝（一）
摘要:腺相關病毒(AAV)是一種人細小病毒，?因為能作為一種基因治療載體而受到廣泛關注。目前大多數生成rAAV的實驗方案需要共轉染一個載體質粒和一個表達病毒復制和結構基因的包裝質粒到腺病毒(Ad)感染的培養細胞中。但是也可以通過新的輔助質粒(pH3和pH5)，排除了Ad共轉染的需求。輔助質粒表達AA
病毒包裝技術——腺相關病毒(AAV)包裝（二）
2.3?蛋白質分析?為了分析AAV Rep和Cap蛋白質表達，按照2.2部分所述進行質粒轉染。轉染后48小時，將培養物刮到冷PBS/Mg(PBS含有5mM MgCl2)，細胞低速離心沉淀收獲。細胞沉淀在冰上用200ml STM-NP緩沖液(25mM蔗糖,10mM Tris-HCl，pH8
腺相關病毒載體的應用簡介
經過十幾年的研究，重組腺相關病毒的生物學特性已被深入了解，尤其是其在各種細胞、組織和體內實驗中的應用效果方面已經積累了許多資料。在醫學研究中，rAAV被用于多種疾病的基因治療的研究（包括體內、體外實驗）；同時作為一種有特點的基因轉移載體，還廣泛用于基因功能研究、構建疾病模型、制備基因敲除鼠等方面
簡述腺相關病毒的載體特點
1、安全性好 2、對肌肉、肝臟、神經組織等感染效率高 3、載體自身免疫原性低 4、長期表達 5、比較穩定,易于保存和運輸
腺相關病毒的組織嗜性
AAV感染不同組織效果圖不同AAV血清型的組織親和性AAV1載體：明顯的骨骼肌嗜性（包括心肌），神經組織也可以感染；AAV2載體：泛嗜性；最早應用的AAV載體。有效轉導肌肉，肝臟，腦組織，對于視網膜的轉導效率和表達水平良好AAV5載體：視網膜、神經系統、關節滑膜嗜性、肺；AAV8載體：明顯肝嗜性，視
腺相關病毒載體的基本介紹
腺相關病毒載體是利用天然存在的腺相關病毒某些特性經過基因工程改造后產生的一種可供人工轉基因的載體。腺相關病毒（adeno-associated virus，AAV）是簡單的非致病性單鏈DNA病毒，需要輔助病毒參與生活周期，輔助病毒通常為腺病毒（Ad）或者單純皰疹病毒（HSV）。基因組兩端為末端反
簡述腺相關病毒載體的應用
經過十幾年的研究，重組腺相關病毒的生物學特性已被深入了解，尤其是其在各種細胞、組織和體內實驗中的應用效果方面已經積累了許多資料。在醫學研究中，rAAV被用于多種疾病的基因治療的研究（包括體內、體外實驗）；同時作為一種有特點的基因轉移載體，還廣泛用于基因功能研究、構建疾病模型、制備基因敲除鼠等方面
關于腺相關病毒的應用介紹
重組腺相關病毒載體(rAAV) 源于非致病的野生型腺相關病毒，由于其安全性好、宿主細胞范圍廣(分裂和非分裂細胞)、免疫源性低，在體內表達外源基因時間長等特點，被視為最有前途的基因轉移載體之一，在世界范圍內的基因治療和疫苗研究中得到廣泛應用。經過10余年的研究，重組腺相關病毒的生物學特性己被深入了
重組系統腺相關病毒產品說明
一．Cre-loxP重組系統作用原理Cre重組酶和loxP位點Cre重組酶（Cyclization Recombination Enzyme）由大腸桿菌噬菌體P1的Cre基因編碼，是由343個氨基酸組成的38kD的蛋白質。它不僅具有催化活性，而且與限制酶相似，能夠特異性識別loxP位點。LoxP（l
腺相關病毒AAV簡介及應用
一、腺相關病毒簡介腺相關病毒（Adreno-Associated Virus, AAV）是微小病毒科（Parvoviridae）家族的成員之一。這一家族成員是一類微小、無被膜及具有二十面體結構的病毒。病毒顆粒的直徑在20～26nm之間，含有大小在4.7~6kb之間的線狀單鏈DNA基因組。它的復制和增
病毒包裝技術7——腺相關病毒(AAV)包裝介紹
銳賽小課堂技術篇0702-113 摘要: 腺相關病毒(AAV)是一種人細小病毒， 因為能作為一種基因治療載體而受到廣泛關注。目前大多數生成rAAV的實驗方案需要共轉染一個載體質粒和一個表達病毒復制和結構基因的包裝質粒到腺病毒(Ad)感染的培養細胞中。但是也可以通過新的輔助質粒(pH
重組腺相關病毒載體的生產實驗
瞬時轉染 293 細胞制備無腺病毒重組腺相關病毒載體實驗材料293組織培養細胞系pSub201質粒pXX2質粒pXX6質粒試劑、試劑盒完全DMEM 10%FBS培養基完全IMDM 10%FBS培養基CaCl2純DMEM 2%FBS 培養基干冰 乙醇浴硫酸銨飽和硫酸銨乙醇PBS儀器、耗材組織培養板—次
SIRION將為Denali開發腺相關病毒載體
近日，SIRION Biotech與Denali Therapeutics宣布，兩家公司簽訂了一項研發許可和合作協議，SIRION將為Denali開發腺相關病毒載體（AAV），讓基因療法可以跨越血腦屏障，應用于治療帕金森病（PD）、阿茲海默病（AD）、肌萎縮性側索硬化癥（ALS）、及其它神經退行
簡述腺相關病毒載體的基本特點
一、優點 在輔助腺病毒存在下，AAV可以高效定點整合至人染色體中；而現在的AAV載體已經不需要腺病毒輔助，不插入宿主的基因組，而是游離于宿主細胞基因之外，呈衛星狀穩定表達。 腺相關病毒載體（AAV）體內的感染效率極高。不同血清型可以相對特異性的感染心臟，肝臟，骨骼肌等。 腺相關病毒是RG1
腺相關病毒載體的基本構建介紹
1、AAV病毒的感染細胞 AAV載體對于骨骼肌、視網膜、肝細胞、心臟平滑肌細胞、神經元細胞、胰島B細胞、關節滑膜細胞等具有良好的感染效果，而對于淋巴細胞、造血干細胞、神經膠質細胞、成纖維細胞等感染效果較差。 2、病毒的加樣量 病毒量為10-10V.P/Cell時最佳。如果太低，基本檢測不出
關于腺相關病毒載體的基本介紹
腺病毒相關病毒(adeno-associated virus，AAV)是一類單鏈線狀DNA缺陷型病毒。其基因組DNA小于5 kb，無包膜，外形為裸露的20面體顆粒。AAV不能獨立復制，只有在輔助病毒（如腺病毒、單純皰疹病毒、痘苗病毒）存在時，才能進行復制和溶細胞性感染，否則只能建立溶源性潛伏感染
簡述腺相關病毒的組織嗜性
AAV感染不同組織效果圖 不同AAV血清型的組織親和性 AAV1載體：明顯的骨骼肌嗜性（包括心肌），神經組織也可以感染； AAV2載體：泛嗜性；最早應用的AAV載體。有效轉導肌肉，肝臟，腦組織，對于視網膜的轉導效率和表達水平良好 AAV5載體：視網膜、神經系統、關節滑膜嗜性、肺； AA
關于腺相關病毒的基本信息介紹
腺相關病毒（adeno-associated virus，AAV）,也稱腺伴隨病毒,屬于微小病毒科依賴病毒屬,是目前發現的一類結構最簡單的單鏈DNA缺陷型病毒，需要輔助病毒（通常為腺病毒）參與復制。它編碼兩個末端的反向重復序列（ITR）中的cap和rep基因。ITRs對于病毒的復制和包裝具有決定
腺相關病毒載體的基本信息介紹
腺相關病毒載體是利用天然存在的腺相關病毒某些特性經過基因工程改造后產生的一種可供人工轉基因的載體。腺相關病毒（adeno-associated virus，AAV）是簡單的非致病性單鏈DNA病毒，需要輔助病毒參與生活周期，輔助病毒通常為腺病毒（Ad）或者單純皰疹病毒（HSV）。基因組兩端為末端反
自噬雙標腺相關病毒說明（二）
(Tom Egil Hansen and Terje Johansen，BMC Biology，2011)?圖4?Vigene自噬雙標病毒載體圖譜五．Vigene?mCherry-GFP-LC3B?自噬雙標操作方法（一）體外實驗以2型AAV病毒為例，Vigene為您推薦的MOI值104-105，是根
腺相關病毒（AAV）技術快速入門手冊（二）
rAAV的局限性有哪些？1.體外實驗表達水平較低：主要是因為rAAV病毒的基因組是單鏈DNA，在體外環境形成雙鏈并轉錄翻譯外源基因的效率非常低。可以在體外水平感染rAAV病毒的同時感染輔助病毒比如Ad5型腺病毒或者終濃度10~50mM的丁酸鈉等方法提高細胞實驗的rAAV表達量。2.需較長時間開始表達
干貨：腺相關病毒（AAV）技術快速入門手冊
腺相關病毒（AAV）作為一種安全、持久、高效、高特異性的基因操作工具，在生物學特別是神經生物學領域中被廣泛使用。許多新手對于AAV的使用往往是知其然而不知其所以然。這篇短文將以圖文結合的形式爭取讓大家在最短的時間內全面了解這種病毒工具。 什么是AAV？ 野生型AAV是一種復制缺陷型微