磷酸化多肽及其修飾方法
蛋白質磷酸化是生物界最普遍，也是最重要的一種蛋白質翻譯后修飾，20世紀50年代以來一直被生物學家看作是一種動態的生物調節過程。在細胞中，大概有1/3的的蛋白質被認為是通過磷酸化修飾的。蛋白質的磷酸化修飾與多種生物學過程密切相關，如DNA損傷修復、轉錄調節、信號傳導、細胞凋亡的調節等。磷酸化蛋白質及多肽的研究可以幫助人們闡述上述過程的機理，進一步認識生命活動的本質。近年來隨著蛋白質組技術的不斷發展，蛋白質磷酸化的研究越來越受到廣泛的關注。蛋白質磷酸化在細胞信號轉導中的作用磷酸化多肽主要指肽鏈中的Ser、Tyr和Thr殘基的側鏈羥基被修飾成酸式磷酸酯多肽。磷酸化多肽是研究蛋白質磷酸化過程的必不可少的工具，因此研究蛋白質及多肽的磷酸化反應并確定成熟簡便的合成路線就變得非常重要。目前為止，多肽的磷酸化修飾主要有后磷酸化法和單體法兩種合成方法。后磷酸化法是多肽序列在樹脂上合成完后，再對其中的Ser、Tyr或Thr的側鏈羥基進行磷酸化；單體......閱讀全文
磷酸化多肽及其修飾方法
蛋白質磷酸化是生物界最普遍，也是最重要的一種蛋白質翻譯后修飾，20世紀50年代以來一直被生物學家看作是一種動態的生物調節過程。在細胞中，大概有1/3的的蛋白質被認為是通過磷酸化修飾的。蛋白質的磷酸化修飾與多種生物學過程密切相關，如DNA損傷修復、轉錄調節、信號傳導、細胞凋亡的調節等。磷酸化蛋白質
磷酸化多肽及其修飾方法
蛋白質磷酸化是生物界最普遍，也是最重要的一種蛋白質翻譯后修飾，20世紀50年代以來一直被生物學家看作是一種動態的生物調節過程。在細胞中，大概有1/3的的蛋白質被認為是通過磷酸化修飾的。蛋白質的磷酸化修飾與多種生物學過程密切相關，如DNA損傷修復、轉錄調節、信號傳導、細胞凋亡的調節等。磷酸化蛋白質
磷酸化多肽及其修飾方法
蛋白質磷酸化是生物界最普遍，也是最重要的一種蛋白質翻譯后修飾，20世紀50年代以來一直被生物學家看作是一種動態的生物調節過程。在細胞中，大概有1/3的的蛋白質被認為是通過磷酸化修飾的。蛋白質的磷酸化修飾與多種生物學過程密切相關，如DNA損傷修復、轉錄調節、信號傳導、細胞凋亡的調節等。磷酸化蛋白質及多
多肽磷酸化修飾及檢測方法
磷酸化影響著細胞生命的方方面面。在細胞中，大概有1/3的的蛋白質被認為是通過磷酸化修飾的。蛋白質的磷酸化修飾與多種生物學過程密切相關，如DNA損傷修復、轉錄調節、信號傳導、細胞凋亡的調節等。磷酸化蛋白質及多肽的研究可以幫助人們闡述上述過程的機理，進一步認識生命活動的本質。肽谷生物依據自身原料優勢和技
多肽合成與修飾技術
實驗技術：多肽 合成是一個固相合成順序一般從C端（羧基端）向 N端（氨基端）合成。過去的多肽合成是在溶液中進行的稱為液相合成法。從1963年Merrifield發展成功了固相多肽合成方法以來，經過不斷的改進 和完善，到今天固相法已成為多肽和蛋白質合成中的一個常用技術，表現出了經典液相合成
多肽熒光標記——FITC修飾和AMC修飾
熒光標記所依賴的化合物稱為熒光物質。熒光物質是指具有共軛雙鍵體系化學結構的化合物，受到紫外光或藍紫光照射時，可激發成為激發態，當從激發態恢復基態時，發出熒光。熒光標記技術指利用熒光物質共價結合或物理吸附在所要研究分子的某個基團上，利用它的熒光特性來提供被研究對象的信息。熒光標記的無放射物污染，操
多肽熒光標記——FITC修飾和AMC修飾
熒光標記所依賴的化合物稱為熒光物質。熒光物質是指具有共軛雙鍵體系化學結構的化合物，受到紫外光或藍紫光照射時，可激發成為激發態，當從激發態恢復基態時，發出熒光。熒光標記技術指利用熒光物質共價結合或物理吸附在所要研究分子的某個基團上，利用它的熒光特性來提供被研究對象的信息。熒光標記的無放射物污染，操
多肽修飾合成常用策略（二）
4、豆蔻酰化和棕櫚酰化用脂肪酸酰化N末端可以讓多肽或蛋白質與細胞膜結合。N末端上豆蔻酰化的序列可以使Src家族的蛋白激酶和逆轉錄酶Gaq蛋白靶向結合細胞膜。利用標準的偶聯反應即可將豆蔻酸連接到樹脂-多肽的N末端，生成的脂肽可在標準條件下解離并通過RP-HPLC純化。5、糖基化糖肽類如萬古霉素和替考拉
多肽修飾合成常用策略（一）
多肽是由多個氨基酸通過肽鍵連接而形成的一類化合物，普遍存在于生物體內，迄今在生物體內發現的多肽已達數萬種。多肽在調節機體各系統、器官、組織和細胞的功能活動以及在生命活動中發揮重要作用，并且常被應用于功能分析、抗體研究、藥物研發等領域。隨著生物技術與多肽合成技術的日臻成熟，越來越多的多肽藥物被開發并應
糖肽多肽糖基化修飾
通過化學鍵將單糖（如葡萄糖、半乳糖）或者多糖連接到多肽上的過程，我們將其稱之為多肽糖基化修飾，通過糖基化修飾后得到的多肽，我們稱之為糖肽（Glycopeptides）；糖肽對膜蛋白功能常常有很重要的影響，對特異的生物學功能起介導作用，比如：對細胞具有保護、穩定、組織及屏障等多方面作用；可作為外源性受
多肽熒光標記——FITC修飾和AMC修飾（二）
（2）在整條肽中的某個Lys側鏈接入FITC，Lys側鏈為末端為-NH2的四碳直鏈烷基，直接起到了降低空間位阻的作用。這種修飾方式能夠靈活的在整條肽中任何位置進行FITC修飾，而不僅僅局限于末端。我們所采用的FITC修飾多肽的兩種形式，都具有操作簡便，成功率高，容易分離純化等優點。2.AMC修飾7-
多肽熒光標記——FITC修飾和AMC修飾（一）
熒光標記所依賴的化合物稱為熒光物質。熒光物質是指具有共軛雙鍵體系化學結構的化合物，受到紫外光或藍紫光照射時，可激發成為激發態，當從激發態恢復基態時，發出熒光。熒光標記技術指利用熒光物質共價結合或物理吸附在所要研究分子的某個基團上，利用它的熒光特性來提供被研究對象的信息。熒光標記的無放射物污染，操作簡
多肽PEG聚乙二醇修飾
PEG修飾，即聚乙二醇修飾，又稱聚環氧乙烷修飾，是將PEG通過化學方法偶聯到蛋白質或多肽分子上，從而提升多肽活性的一種方法。自Davies 1977年用PEG 修飾牛血清白蛋白以來， PEG修飾技術廣泛應用于多種蛋白質和多肽的化學修飾。?PEG修飾具有延長半衰期、降低或消失免疫原性、減少毒副作用以及
常用多肽修飾方法及過程綜述
多肽是一種由兩個或多個氨基酸通過肽鍵（酰胺鍵）連接而形成的化合物。多肽在調節機體各系統、器官、組織和細胞的功能活動以及在生命活動中發揮重要作用，并且常被應用于功能分析、抗體研究、藥物研發等領域。而通過對多肽進行修飾進而改變多肽的理化性質也是多肽研究中一種常用的手段。多肽修飾種類繁多，從修飾位點不同則
sumo化與磷酸化修飾聯合分析
隨著質譜技術的不斷進步，大規模修飾組學的方法也越來越成熟，PTM作為生物體內非常重要的生理現象也逐步被揭示出參與各項生命活動。今天我們就一起來學習一篇運用質譜技術對磷酸化修飾和類泛素化修飾鑒定，找出兩種修飾聯合作用對在DNA復制損傷壓力時的響應。該篇文獻來自哥本哈根大學的研究人員于2017年10月發
RGD環肽，AMC（香豆素）修飾多肽
1. RGD環肽簡介在了解RGD肽之前，我們先簡單介紹一下整合素，整合素即整聯蛋白，是一類介導哺乳動物細胞黏附與信號轉導的異二聚體跨膜糖蛋白受體，由α和β亞單位組成，參與包括細胞遷移、細胞侵襲、細胞和細胞間的信號傳導、細胞黏附及血管新生過程等多種細胞活動的調節，其中對整合素αvβ3的研究最為廣泛。整
載體蛋白（KLH,BSA,OVA）偶聯多肽修飾簡介
肽-載體蛋白偶聯多用于制備抗多肽類抗體，單獨的多肽通常太小不足以激起充分的免疫反應，而帶有很多抗原表位的載體蛋白有利于刺激輔助性T細胞，進一步誘導B細胞免疫反應。請記住，免疫系統是將肽-蛋白作為一個整體來激起免疫反應的，因而產生的抗體中有針對多肽的，有針對鏈接劑的，也有針對載體蛋白的。 其中最常見的
胰蛋白酶切磷酸化多肽作圖實驗
胰蛋白酶切蛋白質樣品的制備雙向薄層電泳與層析分離多肽片段反向高效液相層析繪制多肽圖譜實驗材料蛋白質 ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ?試劑、試劑盒甲醇 ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ?
胰蛋白酶切磷酸化多肽作圖實驗
實驗材料 蛋白質試劑、試劑盒 甲醇電泳緩沖液儀器、耗材 凝膠電泳實驗步驟 1. 用單向或者雙向凝膠電泳將 32P 標記的目的蛋白質與其他不需要的成分分開。2. 電泳結束后，用 50% 甲醇清洗三次，時間控制在 6 小時，去處 SDS 和電泳緩沖液將凝膠放在兩張塞熱玢膜（Bio-Rad) 之間吸干。用
胰蛋白酶切磷酸化多肽作圖實驗
胰蛋白酶切蛋白質樣品的制備 雙向薄層電泳與層析分離多肽片段 反向高效液相層析繪制多肽圖譜 ? ? ? ? ? ? 實驗材料 蛋白質
胰蛋白酶切磷酸化多肽作圖_雙向薄層電泳/層析分離多肽
實驗材料多肽樣品試劑、試劑盒電泳緩沖液儀器、耗材平板電泳儀實驗步驟1. 將平板電泳儀（型號 FBE-3000, Phannacia) 放在通過循環儀連接到恒溫水浴的冷卻板上進行電泳。電泳前 30 分鐘將水浴溫度調至 10℃ 到 15℃ 之間。每個電極槽加 400 ml 緩沖液。切兩張 Whatman
胰蛋白酶切磷酸化多肽—反向高效液相層析繪制多肽圖譜
實驗材料胰蛋白酶切樣品試劑、試劑盒尿素或鹽酸胍儀器、耗材離心機實驗步驟1. 加樣前。做一次模擬加樣，進行整個程序的洗脫，測 OD 初始值。記錄所有實驗變量：加樣量、溶劑梯度、流速、吸收范圍等。2. 制備?32P 標記的胰蛋白酶切樣品（需要幾千 cpm 才能有效地檢測到?32P 標記的多肽 )。用 0
蛋白質N磷酸化修飾富集方法進展
蛋白質N-磷酸化修飾富集方法進展 江波1, 高博2, 魏淑嫻2, 梁振1, 張麗華1,*, 張玉奎1 1.中國科學院大連化學物理研究所,醫學蛋白質組全國重點實驗室,國家色譜研究中心, 中國科學院分離分析化學重點實驗室,遼寧 大連 116023 2.中國石油大學(華東)化學化工學院,山東 青
熒光標記肽技術常用的多肽修飾熒光物質
熒光標記所依賴的化合物稱為熒光物質。熒光物質是指具有共軛雙鍵體系化學結構的化合物，受到紫外光或藍紫光照射時，可激發成為激發態，當從激發態恢復基態時，發出熒光。熒光標記技術指利用熒光物質共價結合或物理吸附在所要研究分子的某個基團上，利用它的熒光特性來提供被研究對象的信息。熒光標記的無放射物污染，操作簡
識別特異性酪氨酸磷酸化多肽抗體的制備
實驗步驟基 本 方 案 1 多克隆抗磷酸肽抗體的制備材料B S A -瓊 脂 糖 親 和 基 質（Sigma) 填 裝（如輔助方案 2 ) 于柱床體積IOml的層析柱磷酸化酪氨酸親和基質層析柱（IOml 柱床體積；見輔助方案3)磷酸肽-B S A 偶聯物免疫家兔的粗制血清PB S /疊氮鈉.?含有0
胰蛋白酶切磷酸化多肽作圖實驗—樣品制備
實驗材料蛋白質試劑、試劑盒甲醇電泳緩沖液儀器、耗材凝膠電泳實驗步驟1. 用單向或者雙向凝膠電泳將?32P 標記的目的蛋白質與其他不需要的成分分開。2. 電泳結束后，用 50% 甲醇清洗三次，時間控制在 6 小時，去處 SDS 和電泳緩沖液將凝膠放在兩張塞熱玢膜（Bio-Rad) 之間吸干。用放射性墨
定制多肽、氨基酸和蛋白等表面修飾脂質體
主動靶向藥物傳遞是指利用特定的生物過程如特異性的配體-受體識別和相互作用來提高特定部位的藥物濃度。主動靶向系統以抗體、多肽、糖類、維生素、糖蛋白等作為配體與靶細胞受體進行專屬性作用。其中多肽分子是機體內一類重要的生物活性物質。具有良好的生物相容性、靶向性、無免疫原性、低毒性等優點將其作為配體應用于靶
關于多肽鏈的一級結構加工修飾介紹
⑴N端甲酰蛋氨酸或蛋氨酸的切除：N端甲酰蛋氨酸是多肽鏈合成的起始氨基酸,必須在多肽鏈折迭成一定的空間結構之前被切除。 其過程是： ① 去甲酰化； ② 去蛋氨酰基。 ⑵氨基酸的修飾：由專一性的酶催化進行修飾,包括糖基化、羥基化、磷酸化、甲酰化等。 ⑶二硫鍵的形成：由專一性的氧化酶催化,將
多磷酸化肽標記技術
蛋白質磷酸化是生物界最普遍，也是最重要的一種蛋白質翻譯后修飾，20世紀50年代以來一直被生物學家看作是一種動態的生物調節過程。在細胞中，大概有1/3的的蛋白質被認為是通過磷酸化修飾的。蛋白質的磷酸化修飾與多種生物學過程密切相關，如DNA損傷修復、轉錄調節、信號傳導、細胞凋亡的調節等。磷酸化蛋白質及多
NLRP3磷酸化修飾與炎癥小體通路激活的調控機制
9月21日，Molecular Cell在線發表了國家生物醫學分析中心李濤研究員和周濤研究員合作的題為“NLRP3 phosphorylation is an essential priming event for inflammasome activation”的最新研究成果。該文報道了磷