多磷酸化肽標記技術
蛋白質磷酸化是生物界最普遍，也是最重要的一種蛋白質翻譯后修飾，20世紀50年代以來一直被生物學家看作是一種動態的生物調節過程。在細胞中，大概有1/3的的蛋白質被認為是通過磷酸化修飾的。蛋白質的磷酸化修飾與多種生物學過程密切相關，如DNA損傷修復、轉錄調節、信號傳導、細胞凋亡的調節等。磷酸化蛋白質及多肽的研究可以幫助人們闡述上述過程的機理，進一步認識生命活動的本質。近年來隨著蛋白質組技術的不斷發展，蛋白質磷酸化的研究越來越受到廣泛的關注。蛋白質磷酸化在細胞信號轉導中的作用磷酸化多肽主要指肽鏈中的Ser、Tyr和Thr殘基的側鏈羥基被修飾成酸式磷酸酯多肽。磷酸化多肽是研究蛋白質磷酸化過程的必不可少的工具，因此研究蛋白質及多肽的磷酸化反應并確定成熟簡便的合成路線就變得非常重要。目前為止，多肽的磷酸化修飾主要有后磷酸化法和單體法兩種合成方法。后磷酸化法是多肽序列在樹脂上合成完后，再對其中的Ser、Tyr或Thr的側鏈羥基進行磷酸化；單體......閱讀全文
多磷酸化肽標記技術
蛋白質磷酸化是生物界最普遍，也是最重要的一種蛋白質翻譯后修飾，20世紀50年代以來一直被生物學家看作是一種動態的生物調節過程。在細胞中，大概有1/3的的蛋白質被認為是通過磷酸化修飾的。蛋白質的磷酸化修飾與多種生物學過程密切相關，如DNA損傷修復、轉錄調節、信號傳導、細胞凋亡的調節等。磷酸化蛋白質及多
運用肽庫篩選磷酸化激酶motif方法
Screening Kinase Phosphorylation Motifs Using Peptide LibrariesIsaac A. Manke and Michael B. YaffeCenter for Cancer Research, Massachusetts Institute
磷酸化位點分析實驗-磷酸肽的分離——IMAC 分離/富集磷酸肽
實驗材料蛋白樣品儀器、耗材質譜儀實驗步驟磷酸肽分析的常見困難是由磷酸化的低化學計量值導致的，樣品中相同序列肽段的磷酸肽的含量要比非磷酸化肽段含量少得多，這種情況下即使?32p標記的 2D-PP 上的點，經全蛋白質水解及 HPLC 組分收集，已經確定磷酸肽存在，用質譜技術也難以鑒定磷酸肽。數據依賴的
肽中磷酸化氨基酸位置測定實驗
基本方案 手工EDMAN降解法 ? ? ? ? ? ? 實驗方法原理 磷酸絲氨酸或磷酸蘇氨酸降解后釋放出絲氨酸或蘇氨酸和自由磷酸鹽，而磷酸酪氨酸降
肽中磷酸化氨基酸位置測定實驗
實驗方法原理 磷酸絲氨酸或磷酸蘇氨酸降解后釋放出絲氨酸或蘇氨酸和自由磷酸鹽，而磷酸酪氨酸降解后釋放出磷酸酪氨酸的衍生物——苯胺基噻唑啉酮。 實驗材料 洗脫的磷酸肽（見輔助方案 1） 試劑、試劑盒 5%(V／V)異硫氰酸苯酯(PLTC)溶于吡啶中10:1(V／V)庚烷／
磷酸化位點分析實驗-磷酸肽的分離
實驗方法原理 即使納噴 MS/MS 技術已經成功用于直接分析蛋白酶解產生的磷酸肽但是出于以下一些原因，通常建議在質譜分析前作一些分離：(1) 磷酸肽在蛋白酶切產物中通常只占少數因此容易淹沒在低率度離子產生的總背景中，肽分離技術可濃縮分析物，因此會提高信噪比。(2) 如果磷酸肽被放射性標記并具有相同比
磷酸化位點分析實驗-磷酸肽的分離
2D-PP 分離磷酸肽 RP-HPLC 分離磷酸肽 高分辨凝膠電泳分離磷酸肽 IMAC 分離／富集磷酸肽 ? ? ? ? ? ? 實驗方法原理
肽中磷酸化氨基酸位置測定實驗
實驗方法原理 磷酸絲氨酸或磷酸蘇氨酸降解后釋放出絲氨酸或蘇氨酸和自由磷酸鹽，而磷酸酪氨酸降解后釋放出磷酸酪氨酸的衍生物——苯胺基噻唑啉酮。實驗材料 洗脫的磷酸肽（見輔助方案 1）試劑、試劑盒 5%(V／V)異硫氰酸苯酯(PLTC)溶于吡啶中10:1(V／V)庚烷／乙酸乙酯-10 份庚烷與 1 份
磷酸化位點分析實驗-磷酸肽的分離
實驗方法原理磷酸化分析的原理研究的最常見的磷酸化類型是絲氨酸、蘇氨酸和酪氨酸的磷酸酯化。已知發生的磷酸化還有精氨酸、組氨酸和賴氨酸的亞酰胺化，以及天冬氨酸和谷氨酸的酰化。這些修飾中的其中一些是化學不穩定的，通常觀察不到，除非采取特殊的保護措施防止他們在蛋內質分離過程中消失。舉例來說，組氨酸磷酸化是一
磷酸化位點分析實驗-磷酸肽的分離
? ? ? ? ? ? 實驗方法原理 磷酸化分析的原理研究的最常見的磷酸化類型是絲氨酸、蘇氨酸和酪氨酸的磷酸酯化。已知發生的磷酸化還有精氨酸、組氨酸和賴氨酸的亞酰胺化，以及天冬氨酸和谷氨酸的酰化。這些修飾中的其中一些是化學不穩定的，通常觀察不到，除非采取特殊的保護措