LiCl法轉化畢赤酵母菌
實驗概要本實驗介紹了用LiCl法將重組質粒導入畢赤酵母菌X-33的轉化方法。主要試劑甘油，YPD培養基，50% PEG，1 mol/L LiCl，Sac I主要設備搖床，高速離心機，1.5 ml微量離心管，水浴鍋實驗材料重組質粒pPIC6αA-APC，畢赤酵母菌X-33實驗步驟1. 取畢赤酵母甘油種400 ul至50 ml YPD培養基中，30℃振蕩培養(8-10 h)至OD600~1.0；2. 離心1500 r/min，10 min，收集新活化好的酵母細胞；3. 再用25 ml無菌蒸餾水沖洗，室溫下1500 r/min離心10 min，棄去水；4. 用lml 0.1 mol/L LiCl重懸細胞，轉入1.5 ml微量離心管中，高速離心(10000 r/min，15s)后收集細胞；5. 用400 ul 0.lmol/L LiCl重懸細胞，每管50 ul分裝于1.5 ml eppendorf管中，高速離心(10000 r/min，......閱讀全文
植物基因轉化技術
相關知識植物基因轉化技術是指將外源基因導入植物細胞或組織，獲得轉基因植物的技術。植物基因轉化技術總體上可分為兩大類：1 以生物體為介導的基因轉移法；2 DNA直接導入法。前者如農桿菌介導法，植物病毒介導法；后者如基因槍法、電擊法、聚乙二醇法、脂質體法及花粉管通道法。其中應用最廣的是根癌農桿菌介導法。
植物基因轉化常用方法
一. 植物遺傳轉化的方法 植物遺傳轉化技術可分為兩大類：一類是直接基因轉移技術，包括基因槍法、原生質體法、脂質體法、花粉管通道法、電激轉化法、PEG介導轉化方法等，其中基因槍轉化法是代表。另一類是生物介導的轉化方法，主要有農桿菌介導和病毒介導兩種轉化方法，其中農桿菌介導的轉化方法操作簡便、成本低、轉
植物基因轉化常用方法
一 植物遺傳轉化的方法 植物遺傳轉化技術可分為兩大類：一類是直接基因轉移技術，包括基因槍法、原生質體法、脂質體法、花粉管通道法、電激轉化法、PEG介導轉化方法等，其中基因槍轉化法是代表。另一類是生物介導的轉化方法，主要有農桿菌介導和病毒介導兩種轉化方法，其中農桿菌介導的轉化方法操作簡便、成本低、轉
基因槍法轉化小麥實驗
實驗材料幼胚盾片 ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ?試劑、試劑盒乙醇 ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ?漂白消毒劑 ? ?
基因槍法轉化大麥實驗
實驗材料麥穗試劑、試劑盒植物凝膠乙醇次氯酸鈉蒸餾水亞精胺儀器、耗材EP 管移液槍實驗步驟1. 組織培養基的準備( 1 ) 首先準備所需濃度 2 倍的植物凝膠，高壓滅菌（見注 2 ) 。( 2 )? 所有的組織培養基都要過濾滅菌，因此除了無菌的儲備液，其他培養基成分按所需濃度 2 倍的量混勻，調到合適
轉基因技術的轉化過程
(1）提取目的基因 從生物有機體復雜的基因組中,分離出帶有目的基因的DNA片段，或者人工合成目的基因，或從基因文庫中提取相應的基因片段和PCR技術進行目的基因的增殖。 (2)將目的基因與運載體結合 在細胞外, 將帶有目的基因的DNA片段通過剪切、粘合連接到能夠自我復制并具有多個選擇性標記的運輸
外源基因轉化的用途
利用外源基因轉化已經產生了轉基因學科，利用重組DNA技術可以將以前沒有的新特性引入生物體。通過轉基因創造的生物體很多，從細菌到哺乳動物，包括綿羊和猴子，它們有多種用途：用于研究發育遺傳學、疾病過程和基因調控等。轉基因動物可以生產藥物，并增加牛奶或肉類的產量。來自轉基因動物的組織和器官可以用于輸血和移
植物基因轉化常用方法3
（三）改良植物性狀的策略 基因克隆技術提供了一種新的改良植物的方法，它可以直接的改變植物的基因型。有兩種策略可以應用。 1） 基因附加：通過添加1個或多個基因改變植物的性狀。 2） 基因扣除：利用基因工程技術使一個或多個植物已經存在的基因失活。 滅活植物基因是通過反義技術來實現的。將外源基因
基因槍法轉化大麥實驗
實驗材料麥穗 ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ?試劑、試劑盒植物凝膠 ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ?? 乙醇 ? ? ? ?
植物基因轉化常用方法2
（二）Ti質粒轉化植物細胞的戰略 １?. Ti質粒的改造 有以下理由使天然的Ti質粒不能作為表達載體使用： a.?生長在培養基上的植物轉化細胞產生大量的生長素和分裂素阻止了細胞再生長為整株植物，因此，必須除去生長素和分裂素基因。 b.?有機堿的合成與T-DNA的轉化無關，而且可能會影響植物細
植物基因轉化常用方法4
1.2?其它的基因附加工程在水稻、棉花、馬鈴薯、番茄和其它作物上也進行了δ-內毒素工程，獲得昆蟲抗性也不僅僅是指有著一種方法。蛋白酶抑制劑也是較好的選擇，它可以一只昆蟲腸道內的蛋白酶活性，阻止或減緩害蟲生長，許多植物能產生蛋白酶抑制劑，如豇豆和common bean,?他們的基因已經被成功的轉移到其
癌基因轉化細胞：基因組DNA轉染法
實驗概要?癌基因轉化細胞實驗步驟1．提取基因DNA（含癌基因）。2．DNA準備：取供體DNA50～100微克，加3M NaCl或醋酸鈉使最終濃度至0.3M混勻。3．再加2倍體積無水乙醇，3000轉/分離心10分鐘，去上清。4．加入轉染緩沖液，待DNA充分融解后，再加入2.5M CaCl2，令最終濃度
基因槍法轉化小麥實驗（二）
實驗材料?BIO-RAD 亞微米金粉試劑、試劑盒?無水乙醇TE 緩沖液亞精胺儀器、耗材?離心管實驗步驟 1. 準備金粉顆粒( 1 ) 稱取 20 m BIO-RAD 亞微米金粉（0.6 μm) 至 1.5 ml 離心管中，加入 1 ml 無水乙醇。超聲波處理 2 min，短暫離心 3s，然后棄上清。
影響基因槍轉化的因素？
首先是氣源的壓力大小，以及射擊距離，實驗證明轟擊次數太多也會造成對細胞的傷害，因此一般以2-3次為宜。
基因槍法轉化大麥實驗（二）
4. 粒子轟擊幼胚(1) 幼胚滲透處理轟擊前，取分離 1 天后的幼胚，放在高滲培養基中處理 4 h。每皿 20~30 枚幼胚，置于培養皿中心 1.6 cm2 范圍內，盾片朝上。胚可以放得緊密一些，但相互之間不要碰到。轟擊之后幼胚繼續高滲處理 16 h。(2) 基因槍準備① 基因槍所有組件和內部的槍體
基因槍法轉化大麥實驗（一）
實驗材料?麥穗試劑、試劑盒?植物凝膠乙醇次氯酸鈉蒸餾水亞精胺儀器、耗材?EP 管移液槍實驗步驟 1. 組織培養基的準備( 1 ) 首先準備所需濃度 2 倍的植物凝膠，高壓滅菌（見注 2 ) 。( 2 )? 所有的組織培養基都要過濾滅菌，因此除了無菌的儲備液，其他培養基成分按所需濃度 2 倍的量混勻，
基因槍法轉化小麥實驗（一）
實驗材料?幼胚盾片試劑、試劑盒?乙醇漂白消毒劑儀器、耗材?誘導培養基實驗步驟 下面介紹的是經過優化的針對幼胚盾片轉化的方法，幼穗可以代替幼胚盾片使用。對某些特定的品種，幼穗轉化比幼胚盾片轉化更有效，如普通小麥品種 T.aestivum vars. Baldus 和 Brigadier，以及其他小
基因電轉化技術的創新介紹
常規的轉染包括脂質體，電轉化和病毒法。普通的293、Hela等細胞系，脂質體轉染也能達到70-80%。而對于其他一些極難轉染的細胞，如原代神經元，原代神經干細胞，免疫細胞等來說，脂質體轉染不僅轉化效率很低（約10%），而且細胞死亡率極高。因此有些研究人員不得不轉用更加昂貴而且毒性更大的病毒包被法。病
基因工程技術轉化正加速
“傳統的抗體在人體或動物身上反復使用的時候會產生第二抗體，我們現在通過采用國際上先進的基因工程表達手段，當抗體到達目標之后，不會產生第二抗體，可以反復使用，效果好很多。”近日，在青島國際院士港內，博隆基因公司技術負責人尹燕博介紹，公司團隊在前期科研基礎上，開展新型基因工程疫苗、治療性抗體等生物制
基因工程技術轉化正加速
“傳統的抗體在人體或動物身上反復使用的時候會產生第二抗體，我們現在通過采用國際上先進的基因工程表達手段，當抗體到達目標之后，不會產生第二抗體，可以反復使用，效果好很多。”近日，在青島國際院士港內，博隆基因公司技術負責人尹燕博介紹，公司團隊在前期科研基礎上，開展新型基因工程疫苗、治療性抗體等生物制
基因槍轉化的效率如何評估？
遺傳育種的轉化效率大概是10-3，瞬時表達大概每個樣品打2-3槍，每個樣品打三個重復即可。
關于轉基因技術的轉化過程介紹
(1）提取目的基因 從生物有機體復雜的基因組中,分離出帶有目的基因的DNA片段，或者人工合成目的基因，或從基因文庫中提取相應的基因片段和PCR技術進行目的基因的增殖。 (2)將目的基因與運載體結合 在細胞外, 將帶有目的基因的DNA片段通過剪切、粘合連接到能夠自我復制并具有多個選擇性標記的運輸
美研究人員發現負責脂肪轉化基因
??? 很多人為保持身材苗條而不得不在美味的高熱量食物面前望而卻步，不過一項最新研究有望給他們帶來福音。美國研究人員在人體內發現一種負責將碳水化合物轉化為脂肪的基因，這一發現有望幫助人們控制體重。??? 據路透社3月19日報道，美國加州大學伯克利分校的研究人員發現，一種名為DNA-PK的基因似乎可以
Science轉化醫學：基因治療再獲重要突破
哈佛醫學院和波士頓兒童醫院的研究人員通過基因治療，成功使遺傳性耳聾的小鼠恢復了聽力。這一成果發表在七月八日的Science Translational Medicine雜志上，為治療基因突變引起的聽力損失奠定了基礎。 “我們的基因治療還需要進一步優化，相信在不久的將來它就能用于臨床試驗，”哈佛
基因槍法轉化小麥實驗——準備供體材料
實驗材料幼胚盾片試劑、試劑盒乙醇漂白消毒劑儀器、耗材誘導培養基實驗步驟下面介紹的是經過優化的針對幼胚盾片轉化的方法，幼穗可以代替幼胚盾片使用。對某些特定的品種，幼穗轉化比幼胚盾片轉化更有效，如普通小麥品種 T.aestivum vars. Baldus 和 Brigadier，以及其他小麥亞族 Tr
曹曉風：促進基因編輯作物育種成果轉化
“鑒于基因編輯育種與常規育種、生物技術育種并無實質差異，建議國家盡快建立基因編輯作物品種審批相關的管理條例。”全國政協委員、中科院院士曹曉風在兩會期間接受《中國科學報》采訪時說。 她表示，傳統育種方法耗時、費力、不確定因素較多，研發新一代的育種技術是各國農業爭奪的制高點。以CRISPR/Cas
外源基因人工轉化轉染的方法
將外源基因導入生物體的過程稱為轉化。這可以自然發生，也可以人為發生。人工轉化轉染方法包括：（a）化學方法，有磷酸鈣沉淀法、DEAE -葡聚糖絡合和脂質介導的DNA轉化法；（b）物理方法，包括電穿孔、微注射和基因槍法；（c）重組法，比如利用病毒作為載體。
植物基因轉化方法分為這三種！
農桿菌介導基因轉化： 轉化原理:農桿菌是普遍存在于土壤中的一種革蘭氏陰性細菌，它能在自然條件下趨化性地感染大多數雙子葉植物的受傷部位，并誘導產生冠癭瘤或發狀根。根癌農桿菌和發根農桿菌中細胞中分別含有Ti質粒和Ri質粒，其上有一段T-DNA，農桿菌通過侵染植物傷口進入細胞后，可將T-DNA插入到
轉化生長因子β信號通路相關的基因介紹－MYC基因
該基因編碼的蛋白質是一種多功能的核磷蛋白，在細胞周期進展、凋亡和細胞轉化中起到作用。作為調節特定靶基因轉錄的轉錄因子發揮作用。這種基因的突變、過度表達、重排和易位與多種造血腫瘤、白血病和淋巴瘤，包括伯基特淋巴瘤有關。有證據表明，來自上游、非aug（cug）幀和下游aug起始位點的選擇性翻譯起始導致兩
轉化生長因子β信號通路相關的基因介紹－INHBA基因
這個基因編碼tgfβ（轉化生長因子β）超家族的一個成員。編碼的前蛋白經蛋白質水解處理，生成二聚激活素和抑制素蛋白復合物的亞單位。這些復合物分別激活和抑制垂體的促卵泡激素分泌。編碼的蛋白質也在眼睛、牙齒和睪丸的發育中起作用。該基因的高表達可能與癌癥惡病質有關。[由RefSeq提供，2016年8月]Th